2015-03-20
449
Для количественной оценки фракций комплемента, в том числе и С3 фракции, используется простая радиальная иммунодиффузия в геле. В пластиковые чашки или пластины вносят расплавленный чистый агар (агар Difko или агарозу), смешанный с диагностической моноспецифической сывороткой к третьему компоненту комплемента (С3) человека. После застывания агара в нем вырезают лунки диаметром 2 мм и в них вносят микрошприцом по 2 мкл исследуемых сывороток. Иммунодиффузию проводят во влажной камере при температуре 200С в течение суток. В контрольные лунки вносится стандартная сыворотка, содержащая известное количество С3 компонента комплемента. Через сутки оценивают результат иммунодиффузии по измерению диаметра зоны преципитации вокруг лунки с внесенной исследуемой сывороткой. Расчет концентрации С3 компонента комплемента проводится по калибровочной кривой, построенной по результатам измерения диаметра зон преципитатов разных разведений стандартной сыворотки.
Таблица для определения количества лизоцима и С3 компонента комплемента
|
|
|
| Лизоцим | С3 компонента комплемента | ||
| Диаметр зоны лизиса микрококка (см) | Содержание лизоцима (мкг/мл) | Диаметр зоны преципитации (см) | Количество С3 компонента комплемента (г/л) |
| 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 | 4,9 5,0 5,4 5,9 6,5 7,2 7,9 | 0,32 0,36 0,42 0,48 0,55 0,65 0,82 | 0,4 0,81 1,62 2,35 3,24 6,48 12,96 |
Измерьте диаметр зоны лизиса микрококка на чашке для определения лизоцима и зоны преципитации вокруг лунки с исследуемой сывороткой на чашке для определения С3 компонента комплемента. Используя данные таблицы, пересчитайте количество лизоцима и С3 компонента комплемента. Подсчитайте количество колоний кишечной палочки в опытной и контрольной чашках для определения БАС, по формуле определите уровень БАС в процентах. Все данные внесите в протокол, сравните с нормативными значениями.
ПРОТОКОЛ
Цель:
| ФИО обследуемого | БАС | Лизоцим | Комплемент | ||||
| Количество колоний в контрольной чашке | Количество колоний в опытной чашке | БАС (%) | Диаметр зоны лизиса микрококка (см) | Количество лизоцима (мкг/ мл) | Диаметр зоны преципитации | Количество комплемента (г/л) | |
| Нормативные значения* (пол-мужской, возраст – 18 лет, сезон обследования – весна) | - | - | 80,6 | - | 6,8 | - | 1,23 |
| Обследуемый А. |
Вывод: (Ответить на вопросы: 1. По каким показателям выявлены изменения в состоянии естественной резистентности? 2. Сделайте заключение о состоянии естественной резистентности у обследуемого? Что может быть причиной этих изменений?
| занятие №5 : | Антитела Методы получения антител. Определение концентрации иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии |
| УЧЕБНАЯ Цель: | 1. Изучить строение, функции и кинетику образования антител 2. Овладеть навыками получения и определения концентрации антител. |
Вопросы для подготовки
|
|
|
1. Общий план строения иммуноглобулина. Константные и вариабельные домены иммуноглобулинов. Изотипы иммуноглобулинов. Понятие об аллотипах и идиотипах.
2. Строение вариабельных доменов иммуноглобулинов. Гипервариабельные участки. Структура антигенсвязывающих участков.
3. Физические силы, участвующие во взаимодействии антигена с антителом. Аффинность взаимодействия антигена и антитела.
4. Иммуноглобулины классов (G, M, А, D и E), особенности строения и биологические функции.
5. Секреторный IgA. Синтез и роль в защите слизистых оболочек.
6. Эффекторные функции антител. Нейтрализация, опсонизация, комплементзависимый цитолиз. Значение изотипов антител.
7. Гибридомы и моноклональные антитела. Области применения.
8. Кинетика синтеза антител. Первичный и вторичный иммунный ответ. Механизм переключения изотипов антител при иммунном ответе.
9. Методы количественного определения иммуноглобулинов (радиальная иммунодиффузия по Манчини).
