2015-03-20
327
Суспензию лимфоцитов смешивают с антисывороткой к определенному антигену (HLA-В8, HLA-B27 и т.д.), инкубируют 1 час при 25°С, добавляют комплемент и инкубируют вновь 2 ч при 37°С, а затем добавляют трипановый синий или эозин. В случае присутствия в лимфоцитах антигена, соответствующего антителам, содержащимся в сыворотке, антитела в присутствии комплемента повреждают мембрану лейкоцитов, краска проникает в их цитоплазму и они окрашиваются в синий или же красный цвет (если используется эозин).
Протокол
Цель:
Рис. с обозначениями
Вывод: (Ответить на вопросы: 1. Какие HLA обнаружены? 2. Как получают сыворотки для HLA-типирования? 3. Как защитить содержимое лунок от высыхания в процессе постановки реакции? 4. Когда и с какой целью проводят HLA-типирование?)
| занятие №7 : | Т-, В-лимфоциты. Клеточный и гуморальный иммунный ответ Методы выявления маркеров и рецепторов иммунокомпетентных клеток. Определение количества Т- и В-лимфоцитов |
| УЧЕБНАЯ Цель: | 1. Изучить механизмы клеточного и гуморального адаптивного иммунного ответа. 2. Овладеть методикой определения количества Т- и В-лимфоцитов. |
Вопросы для подготовки
1.Субпопуляции Т-лимфоцитов и корецепторы. Дифференцировка субпопуляций Т-клеток.
2. Регуляторные Т-лимфоциты. Их разновидности, развитие и роль в контроле иммунного ответа.
3. Строение Т-клеточного рецептора (ТСR). Полипептидлные цепи CD3. Основные принципы внутриклеточной сигнализации – мотивы ITAM и ITIM.
4. Дифференцировка CD4+ Т-лимфоцитов в Th1- и Th2-клетки. Факторы, определяющие этот процесс. Роль цитокинов. Спектры цитокинов, вырабатываемых Th1- и Th2-клетками. Антагонизм Th1- и Th2-клеток.
5. Процессинг антигена с помощью МНС I и II. Структура комплекса антигенного пептида с молекулами МНС.
6. Особенности распознавания антигенов рецепторами Т-клеток (феномен двойного распознавания).
7. Эффекторное звено клеточного иммунного ответа. Тс, маркеры и функции.
8. Объединенная схема клеточной кооперации в процессе клеточного иммунного ответа.
9.Субпопуляции В-лимфоцитов и корецепторы. Дифференцировка субпопуляций В-клеток. Строение В-клеточного рецептора (ВСR).
10. Постановка и механизм реакции Е-РОК и ЕАС-РОК для определения количества Т- и В-лимфоцитов.
11. Проточная цитометрия. Суть метода, оборудование. Применения в иммунологии.
12. Объединенная схема клеточной кооперации в процессе гуморального иммунного ответа.
13. Иммунологическая память. Клетки памяти. Их свойства, маркеры, пути миграции, гомеостатический контроль, иммунологические функции. Преимущества вторичного иммунного ответа перед первичным.
Практическая работа
