Работа №8 Определение содержания мочевины в сыворотке крови и моче по цветной реакции с диацетилмонооксимом

Принцип метода.

Мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа красный комплекс.

Реактивы.

1. Стандартный раствор (10 мл)

мочевина 16,65 ммоль/л

2. Диацетилмонооксим (10 таблеток)

каждая таблетка содержит диацетилмонооксим 0,5 ммоль, тиосемикарбазид

0,08 ммоль, соль трехвалентного железа 2,5 мкмоль.

Состав реакционной смеси.

Диацетилмонооксим 5,0 ммоль/л

Тиосемикарбазид 0,9 ммоль/л

Кислота серная 0,9 моль/л

Соль железа трехвалентного 25,0 мкмоль/л

Соотношение сыворотка/ реакционная смесь 1/121

Приготовление рабочих растворов.

Раствор 1. В мерной колбе вместимостью 50 мл растворяют в 30 мл дист. воды при повышенной температуре одну таблетку реактива 2. После охлаждения доливают водой до метки. Наличие небольшого нерастворимого осадка не мешает определению.

Устойчивость: несколько месяцев (с +15 до +25 С).

Раствор 2. Приготовляют смешиванием 1 доли Раствора 1 с 1 долей раствора серной кислоты.

Устойчивость: 1 день (с +15 до +25 С).

Проведение анализа.

Длина волны (490-540) нм

Кюветы 1 см

Температура (с +15 до +25 С)

В трех тонкостенных пробирках смешивают раствор 2 в соотношении 200 + 1 с сывороткой или разведенной мочой (проба), реактивом 1 (стандарт) или дистиллированной водой (контрольный раствор) и содержимое перемешивают. Мочу перед анализом разводят дист. водой от 1 + 50 до 1 + 100 (результат х разведение).

Отмерить (мл)	Проба	Стандарт	Контроль. Раствор
Сыворотка, Разведенная моча Реактив 1 Дист. вода Раствор 2	0,01 - - 2,00	- 0,01 - 2,00	- - 0,01 2,00
Отверстие пробирок закрывают алюминиевой фольгой, и пробирки помещают точно на 10 мин на кипящую водяную баню. Потом содержимое пробирок быстро охлаждают проточной водой и измеряют оптическую плотность пробы (А₁) и стандарта (А₂) против контрольного раствора. Измерение следует провести до 15 мин после охлаждения.