Работа №7 Тимоловая проба

Тимоловая проба предложена в 1944 г. Маклаганом (иначе именуется пробой Маклагана). Ее химическая сущность состоит в образовании глобулин-тимол-липидного комплекса, содержащего 40% глобулинов, 32% тимола, 18% холестерола и 10% фосфолипидов. Все известные к настоящему времени варианты постановки пробы тимолового помутнения отличаются, главным образом способом приготовления буферного раствора. Если в оригинальной методике Маклагана тимол растворяют в веронал-мсдиналовом буфере при его нагревании (что, как установлено, приводит к частичному окислению тимола), то в методе Хуэрто и Поппера этот недостаток устраняется предварительным переводом тимола в раствор и добавлением его к барбитуратовому буферу, приготовленному по прописи Маклагана.

Принцип метода. Метод базируется на образовании глобулин -тимол -липидного комплекса, вызывающего помутнение раствора при взаимодействии сыворотки с тимоло-вероналовым буфером.

Реактивы

1. Этанольный раствор тимола, 100 г/л.

2. Буферный раствор.

3. Тимоло-вероналовый буфер.

4. Стандартная суспензия сульфата бария.

Ход определения. К 6мл (3 мл) тимоло-вероналового буфера прибавляют 0,1 мл (0,05 мл) негемолизированной сыворотки, содержимое пробирки перемешивают, оставляют стоять на 30 мин при комнатной температуре (25°С), а затем фотометрируют при длине волны 660 нм и учитывают показания абсорбции о сравнении с таковыми контрольной пробы (6 или 3 мл буферного раствора)

Расчет производят по калибровочной кривой. Для построения из стан­дартной суспензии ВаS04 готовят ряд разбавлений, получаемых добавлением к стандартной смеси раствора серной кислоты. Найденные значения абсорб­ции соответствуют единицам помутнения по Shank – Haagland (S-Н).

Так, оптическую плотность смеси, приготовленной из 1,35 мл стандарт­ной суспензии ВаS04 (реактив 4) и 4,65 мл раствора Н₂ S04 (0,2 н), принима­ют за 5 ед S-Н, смеси, состоящей из 2,70 мл суспензии и 3,30 мл кислоты, за 10 ед, а из 5,40 мл суспензии и 0,60мл кислоты — за 20 сд S-Н.

Приготовленные таким образом калибровочные смеси тщательно встряхи­вают и тотчас фотометрируют при длине волны 660 нм (630—690 нм: красный светофильтр), используя кюветы с длиной оптического пути 10 мм. Контроль­ной пробой служит соответствующий объем дистиллированной воды. На ос­новании полученных данных по общеизвестным принципам строят градуировочную (калибровочную) кривую. Показатели пробы у практически здоровых людей (норма) составляют 0-4 ед S-Н.