2015-04-08
764
Принцип метода глюкоза окисляется при участии глюкозооксидазы кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, количество которой определяется по ее способности в присутствии пероксидазы окислять диамины с образованием окрашенных продуктов.
Реактивы:
1) Эталон глюкозы 25 ммоль/л;
2) Депротеинизирующий реактив;
3) Трис-буфер;
4) Смесь ферментов (глюкозооксидаза, пероксидаза) и 4-аминофеназон/флакон;
5) Буфер-хромоген: фосфатный буфер 0,14 моль/л, 3-метилфенол 0,01 моль/л.
Приготовление рабочих растворов:
1. Депротеинизирующий раствор — содержимое флакона с реактивом 2 доводят дист. водой до 80 мл.
2. Раствор глюкозы - смешивают 2 мл реактива 1 с 3 мл дист. воды /10 ммоль/л/.
3. Глюкозный реактив — содержимое флаконов 3,4,5 последовательно растворяют в 100 мл воды, доводят дист. водой до 500 мл.
Ход анализа: /без депротеинизации/
Без осаждения белков анализируют сыворотку, плазму и разведенную мочу /в10 - 50 раз/. Результат умножают на разведение.
| Отмерить, мл | Проба | Эталон | Контроль |
| Сыворотка | 0,1 | - | - |
| Раствор глюкозы | - | 0,1 | - |
| Вода дистил. | - | - | 0,01 |
| Глюкозный реактив | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
Инкубируют 30 мин., при 37°С, измеряют оптическую плотность пробы (А1) и эталона (А2) против контроля, длина волны 480-520 им, кювета 0,5 см.
|
|
|
Цельную кровь, гемолитическую, иктерическую или липемическую сыворотку предварительно депротеинизируют, центрифугируют и определяют глюкозу в надосадочной жидкости.
Формула расчета:
А1
Глюкоза /ммоль/л/ = ———10
А2
