double arrow

Работа № 13 Определение глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом


Принцип метода глюкоза окисляется при участии глюкозооксидазы кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, количество которой определяется по ее способности в присутствии пероксидазы окислять диамины с образованием окрашенных продуктов.

Реактивы:

1) Эталон глюкозы 25 ммоль/л;

2) Депротеинизирующий реактив;

3) Трис-буфер;

4) Смесь ферментов (глюкозооксидаза, пероксидаза) и 4-аминофеназон/флакон;

5) Буфер-хромоген: фосфатный буфер 0,14 моль/л, 3-метилфенол 0,01 моль/л.

Приготовление рабочих растворов:

1. Депротеинизирующий раствор — содержимое флакона с реактивом 2 доводят дист. водой до 80 мл.

2. Раствор глюкозы - смешивают 2 мл реактива 1 с 3 мл дист. воды /10 ммоль/л/.

3. Глюкозный реактив — содержимое флаконов 3,4,5 последовательно растворяют в 100 мл воды, доводят дист. водой до 500 мл.

Ход анализа: /без депротеинизации/

Без осаждения белков анализируют сыворотку, плазму и разведенную мочу /в10 - 50 раз/. Результат умножают на разведение.

Отмерить, мл Проба Эталон Контроль
Сыворотка 0,1 - -
Раствор глюкозы - 0,1 -
Вода дистил. - - 0,01
Глюкозный реактив 2,0 2,0 2,0

Инкубируют 30 мин., при 37°С, измеряют оптическую плотность пробы (А1) и эталона (А2) против контроля, длина волны 480-520 им, кювета 0,5 см.

Цельную кровь, гемолитическую, иктерическую или липемическую сыворотку предварительно депротеинизируют, центрифугируют и определяют глюкозу в надосадочной жидкости.

Формула расчета:

А1

Глюкоза /ммоль/л/ = ———10

А2