Работа №15. Определение пировиноградной кислоты

К наиболее важным в диагностическом отношении метаболитам углеводно­го обмена следует отнести пировиноградную и молочную кислоту.

Пировиноградная кислота (ПВК) — один из центральных метаболитов угле­водного обмена. Она образуется в процессе распада гликогена и глюкозы в тканях, при окислении (дегидрировании) молочной кислоты (МК), а также в результате превращения ряда аминокислот. При окислительном декарбокси-лировании ПВК возникает ацетил-КоА, который вступает в цикл Кребса. Окисление ацетил-КоА в цикле трикарбоновых кислот обеспечивает синтез АТФ.

ПВК — один из основных субстратов гликонеогенеза. Она принимает уча­стие в биосинтезе N-ацетилнейраминовой кислоты, глюкозы, гликогена, ока­зывает большое влияние на протекание процессов обмена веществ в централь­ной нервной системе.

Предлагаемый метод является модификацией метода Умбрайта и отличается тем, что пировиноградная кислота определяется непосредственно в центрифугате крови, после осаждения белков.

Принцип: Пировиноградная кислота с 2,4-динитрофенилгидразином образует гидразон, который со щелочью дает соединение коричнево-красного цвета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию пировиноградной кислоты и определяется фотометрически.

Реактивы:

1) 10% раствор трихлоруксусной кислоты. 100 г ТХУ растворяют в 1000 мл дистиллированной воды.

2) 0,1% раствор 2,4-динитрофенилгидразина (ДНФГ). 50 мг реактива растворяют в 10 мл концентрированной соляной кислоты при слабом подогревании. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 50 мл.