2015-04-17
464
1. Постановка и учет реакции связывания комплемента (РСК). Реакцию ставят в соответствии с таблицей 11. РСК сопровождается постановкой следующих контрольных реакций:
а). контроль сыворотки. Исключают антиген, заменяя его физиологическим раствором необходимого объема;
б). контроль антигена. Исследуемую сыворотку крови в реакции заменяют соответствующим объемом физиологического раствора.
В контрольных пробах должен наблюдаться гемолиз эритроцитов барана, т.к. в результате отсутствия антигена (в 1-м контроле) или антитела (во 2-м контроле), комплемент остается в несвязанном состоянии, вызывая гемолиз эритроцитов барана в присутствии гемолитической сыворотки.
2. Постановка и учет реакции кольцепреципитации по Асколи для выявления термостабильного антигена возбудителя сибирской язвы (B. anthracis) в материале (кожа, шерсть), подозрительном на загрязнение данными микробами. В преципитационную пробирку наливают цельную преципитирующую сибиреязвенную сыворотку в количестве 0,2 мл, пастеровской пипеткой наслаивают по стенке пробирки 0,2 мл исследуемого антигена. Антиген готовят путем кипячения материала в растворе кислоты. В контрольную пробирку добавляют вместо антигена физиологический раствор. В случае положительного результата на границе антигена и сыворотки образуется преципитат в виде кольца.
Таблица 10. Схема постановки реакции связывания комплемента
| Компоненты реакции | Опыт | КПС | КОС | КС | КА | КК | КГС |
| Сыворотка больного 1:5, мл | 0,5 | - | - | 0,5 | - | - | - |
| Антиген в рабочем титре, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | - | 0,5 | 0,5 | - |
| Комплемент в рабочей дозе, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Положительная сыворотка, мл | - | 0,5 | - | - | - | - | - |
| Отрицательная сыворотка, мл | - | - | 0,5 | - | - | - | - |
| Физиологический раствор | - | - | - | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 1,0 |
| Инкубация при 370 С в течение 30 минут | |||||||
| Гемолитическая система | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
| Инкубация при 370 С в течение 30 минут, учет результатов |
Обозначения: КПС – контроль положительной сыворотки, КОС – контроль отрицательной сыворотки, КА- контроль антигена, КК – контроль комплемента, КГС – контроль гемолитической системы.
3. Учет реакции преципитации в геле для определения токсигенности дифтерийных бактерий (демонстрация).
Чашку Петри заливают питательным агаром, на дно чашки накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной противодифтерийной антитоксической сывороткой. Перпендикулярно полоске бумаги засевают исследуемую культуру. Посев инкубируют при 370 С в течение 24 часов. Выделяющийся при росте дифтерийной палочки токсин диффундирует в питательную среду и вступает в реакцию с антитоксическими антителами. В местах взаимодействия дифтерийного токсина с антителами формируется преципитат в виде беловатых линий (рис. 39).
|
| Рис. 39. Определение токсигенности дифтерийных бактерий (РП в геле) |
4. Реакция нейтрализации токсина антитоксином при ботулизме (демонстрация). Реакцию ставят с фильтратом, полученным из продуктов, послуживших причиной отравления больного. К фильтрату добавляют поливалентную противоботулиническую сыворотку в разведении 1:40. Смесь выдерживают 2 часа при температуре 370С, вводят мыши внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. Контрольной мыши вводят 0,5 мл фильтрата. Если токсин, содержащийся в фильтрате, соответствует сыворотке, то произойдет нейтрализация токсина и мышь не погибнет. Контрольная мышь погибает с явлениями параличей.
5. Учет реакции Кумбса при бруцеллезе (демонстрация). Реакция ставится в тех случаях, когда титр классического варианта реакции агглютинации меньше диагностического (1:100). Добавление в пробирки с отрицательными результатами сыворотки против глобулинов человека (антиглобулиновой сыворотки, полученной иммунизацией кроликов иммуноглобулинами человека) приводит к увеличению титра антител.
7. Реакция флоккуляции (демонстрация). Реакцию ставят в два этапа. Сначала по стандартной сыворотке устанавливают пороговую величину флоккуляции Lf(Limes flocculationis) в 1 мл токсина. Lf токсина определяется его минимальным количеством, которое дает инициальную флоккуляцию с 1 международной единицей (ME) сыворотки. Затем известной силы токсин и испытуемую антитоксическую сыворотку разливают в пробирки в определенном объеме, выдерживают в водяной бане при температуре 450 С в течение 30 мин до выпадения хлопьев в одной из них. Инициальная флоккуляция проявляется в той пробирке, где количество токсина соответствует количеству международных единиц сыворотки. Если флоккуляция произошла в 3-й пробирке, в 0,4 мл сыворотки находится 40 ME. Следовательно, 1 мл сыворотки содержит 40:0,4=100 ME.
8. Антистрептолизиновая реакция (демонстрация). Реакция основана на феномене нейтрализации гемолитического действия микробного токсина (0-стрептолизина) антитоксическими антителами иммунной сыворотки. Для постановки реакции готовят разведения исследуемой сыворотки, к каждому из которых добавляют рабочую дозу токсина, инкубируют 45 мин при 370 С, затем вносят равный объем взвеси эритроцитов и инкубируют 1 час при 370 С и 18 часов при комнатной температуре. Обязательным является контроль на возможность спонтанного гемолиза эритроцитов. Положительная реакция характеризуется отсутствием гемолиза в результате нейтрализации стрептолизина (гемолизина) соответствующими антителами.
Тема 16. КЛЕТКИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ. ИММУННЫЙ СТАТУС ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА И МЕТОДЫ ЕГО ОЦЕНКИ. СОВРЕМЕННЫЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ (ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЙ, ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ И РАДИОИММУННЫЙ АНАЛИЗ)
