Приготовление препаратов фиксированных клеток

Фиксированные окрашенные препараты используют для выявления ряда морфологических особенностей, количественного учета микроорганизмов, а также для проверки чистоты культуры. Эти препараты удобны тем, что могут храниться длительное время. Фиксированные окрашенные препараты рассматривают под увеличением 40^х, 90^х. Их приготовление включает этапы: приготовление мазка, высушивание, фиксацию и окраску.

Приготовление мазка

На обезжиренное предметное стекло наносят исследуемый материал, как для препарата «раздавленная капля», и равномерно распределяют его петлей или краем покровного стекла на площади 1-2 см² возможно более тонким слоем.

Высушивание мазка.

Препарат сушат при комнатной температуре на воздухе. Тонкий мазок высыхает очень быстро. Если высушивание мазка замедлено, препарат можно слегка нагреть в струе теплого воздуха, держа предметное стекло высоко над пламенем горелки мазком вверх. Эту операцию проводят очень осторожно, не перегревая мазка, иначе клетки микроорганизмов деформируются.

Фиксация мазка.

Фиксация преследует несколько целей: обеспечить прикрепление клеток к стеклу и тем самым предохранить препарат от смывания; сделать мазок более восприимчивым к окраске, поскольку мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые; сделать безопасным дальнейшее обращение с мазком, что особенно важно, если клетки исследуемого микроорганизма являются патогенными. Фиксацию клеток осуществляют различными веществами и высокой температурой. Весьма распространенный способ фиксации - термическая обработка. Препарат трижды проводят через наиболее горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх. Не следует перегревать мазок, так как при этом могут произойти грубые изменения клеточных структур, а иногда и внешнего вида клеток, например, их сморщивание. После фиксации клетки микроорганизмов окрашивают.