double arrow

Тема 5.4. Механизм действия гормонов. Гормональная регуляция обмена углеводов и липидов


٭Количественное определение малонового диальдегида

Свободными радикалами (R*) называют атомы, молекулы или структурные фрагменты молекул, имеющие на внешних орбиталях неспаренные электроны. В силу исключительно высокой реакционной способности радикалы могут взаимодействовать с различными молекулами, вызывая их повреждение. Малоновыйдиальдегид (МДА)― конечный продукт свободно-радикального окисленияполиненасыщенных высших жирных кислот, входящих в состав фосфолипидов биологических мембран. МДА - химически очень активное вещество: его альдегидные группы взаимодействуют с NH2-группами белков, вызывая необратимую денатурацию последних.

Активация в клетке пероксидных и свободно-радикальных процессов ― это один из факторов патогенеза атеросклероза, ишемической болезни сердца, инфаркта, инсульта, язвенной и ожоговой болезни, онкологических, воспалительных и инфекционных заболеваний, синдрома адаптационного перенапряжения и хронической усталости, диабета. Синдром пероксидации проявляется так же при низком уровне антиоксидантов, стрессе любого происхождения, действии синтетических лекарств и ксенобиотиков, гиподинамии, старении организма, избыточном потреблении в пищу жиров и углеводов, гипоксических состояниях, воздействия вибрации, электромагнитных полей, радиоактивного и ультрафиолетового излучений.

Цель работы. Определить содержание МДА в сыворотке крови.

Принцип метода. МДА реагирует с тиобарбитуратовой кислотой, при этом образуется окрашенное соединение – триметиловый комплекс. Оптическую плотность окрашенного раствора определяют на ФЭК при 532 нм и рассчитывают концентрацию МДА, исходя из молярного коэффициента экстинциитриметилового комплекса.

Ход определения. Студентам выдается готовый лизат, приготовленный следующим образом: к 2 мл крови добавляют 0,2 мл 0,1%-ного раствора Тритон Х-100 и оставляют на 30 мин при 0°С. МДА определяют в образовавшемся лизате по нижеприведенной схеме:

Реактивы и этапы Пробы
Опыт Контроль
Лизат, мл 0,5
Физиологический раствор, мл 1,5
Трихлоруксусная кислота (30%-ный раствор), мл
Инкубируют 15 мин при 0°С    
Центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин    
Надосадочную жидкость аккуратно сливают в помеченные стеклянные пробирки, отбирают из них точно по 2 мл надосадочнойжидкости и добавляют:    
Тиобарбитуратовая кислота (0,5%-ный раствор), мл
Кипятят 15 мин (осторожно!)    
Охлаждают до 15-25°С    
Фотометрируют против воды (λ=532 нм, толщина кюветы 1 см). D532    
Dоп―Dк    

Расчеты

Концентрацию МДА (Сх) вычисляют по формуле:

Cx=76,92•(Dоп―Dк) (мкмоль/л)

Примечание. Величина 76,92 рассчитывается исходя из молярного коэффициента экстинкции триметилового комплекса (1,56·105 М-1см-1) и разведения.

Заказать ✍️ написание учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

Сейчас читают про: