Определение активности триацилглицерол-липазы

Липазы, полученные из различных источников (поджелудочная железа, семена клещевины, молоко, плесневые грибы), различаются по своей активности.

Принцип метода: активность триацилглицерол-липазы определяется по количеству свободных жирных кислот, образующихся в результате действия фермента на пробу жира (по разности между содержанием их в пробе после действия фермента и в исходной пробе). Свободные жирные кислоты титруют 0,1 н раствором щелочи, далее рассчитывают кислотное число пробы жира до гидролиза (контрольный опыт) и после гидролиза (основной опыт). Изменение кислотного числа жира показывает активность триацилглицерол-липазы.

Техника определения: 1 г семян клещевины (одно или два семени) очищают от оболочки, переносят в фарфоровую ступку, тщательно растирают и смешивают с 2 г подсолнечного масла (2,5 см³), добавляют 2 см³ буферной смеси с рН 4,8 и оставляют на 30 минут для гидролиза.

После этого в ступку добавляют 20 см³ смеси спирта с эфиром и несколько капель фенолфталеина. Титрование проводят 0,1н. раствором КОН до образования слабо-розовой окраски.

Контрольный опыт проводится без предварительного настаивания.

Кислотное число жира вычисляется по следующей формуле:

,

где V – количество см³ 0,1 н. КОН;

5,6 – количество мг КОН в 1 см³ 0,1 н. раствора КОН;

m – навеска жира, г.

Формула записи результатов.

1. Объем 0,1 н. раствора КОН (см³), пошедшего на титрование свободных жирных кислот в опытах (основном и контрольном).

2. Кислотное число жира (мг/г) в опытах (основном и контрольном)

3. Вывод.

Материалы, реактивы, оборудование: семена клещевины,подсолнечное масло, буфер с РН 4,8, смесь спирт-эфир (1:1), 0,1 н. КОН, фенолфталеин, ступка, бюретка.