Кинетика действия липазы

Об активности липазы судят по количеству жирных кислот, образующихся при гидролизе жира за определенный промежуток времени (за 1 минуту).

Техника определения: в 6 пробирок наливают по 1 см³ эмульсии жира, по 5 капель препарата липазы или 5 %-го раствора панкреатина и содержимое титруют 0,05 н. раствором NаОН до розового окрашивания. Остальные 5 пробирок помещают в водяную баню или термостат при температуре 37⁰С. Через каждые 10 минут вынимают по одной пробирке и титруют 0,05 н. раствором NаОН в присутствии фенолфталеина до розового окрашивания, результаты титрования записывают, затем графически изображают процесс гидролиза жира под действием липазы, откладывая на оси абсцисс время действия фермента, а на оси ординат – количество щелочи, пошедшее на титрование. Отмечают время, по истечении которого скорость действия липазы замедляется и приближается к минимальной.

Материалы, реактивы, оборудование: препарат липазы или 5 %-й раствор панкреатина, 5 %-я эмульсия жира, 0,5 %-й раствор NаОН, бюретки, водяная баня, термометр, пробирки на 25 см³ с пришлифованными пробками.

Гидролитическое расщепление жира под действием липазы

Гидролиз жира легко наблюдать под влиянием липазы поджелудочной железы. Удобным субстратом является молоко, жир который находится в эмульгированном состоянии. Активатором липазы является желчь. Степень гидролиза жира можно определить по изменению рН за счет образования свободных жирных кислот или количества этих кислот, определяемых титрованием раствором щелочи отдельных проб молока.

Материалы, реактивы и оборудование: молоко цельное охлажденное, препарат липазы, панкреатин,1 %-й спиртовой раствор фенолфталеина, 10 %-й раствор соды, термостат.

Техника определения: в 3 пробирки налить по 2-3 см³ молока предварительно прокипяченного и охлажденного. В каждую из них добавляют по одной капле фенолфталеина и по 1-2 капли 10 %-го раствора соды до розового окрашивания. В первую пробирку приливают пять капель желчи, которая является активатором липазы. В первую и вторую пробирки приливают 2 капли 5 %-го раствора панкреатина (источник липазы), в 3-ю – того же панкреатина, предварительно прокипяченного. Все пробирки ставят в термостат при температуре 37⁰С и наблюдают:

1. В какой пробирке окраска не изменилась? Почему?

2. В каких пробирках окраска изменилась? Почему?

3. В каких пробирках окраска изменилась быстрее и почему?