2015-04-30
4924
Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших дозах (8-20 мкмоль/л), причем 75% из них составляет билирубин, связанный белками (нерастворимый) (5,7-15 мкмоль/л) и 25% «прямой» билирубин (2-5 мкмоль/л). При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия, концентрация билирубина повышается.
Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубин-диглюкоуронид реагирует с диазосмесью непосредственно. Связанный с белками билирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива.
Алгоритм определения
В три пробирки (для общего билирубина, «прямого» и для контроля) вводят реактивы согласно таблице:
| № | Реактивы | Общий билирубин | Прямой билирубин | Контроль |
| Сыворотка, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
| Кофеиновый реактив, мл | 1,75 | - | 1,75 | |
| Физ. раствор | - | 1,75 | 0,25 | |
| Диазосмесь, мл | 0,25 | 0,25 | - |
Для определения «прямого» билирубина колориметрирование следует проводить спустя 5-10 минут после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает «непрямой» билирубин.
Для определения общего билирубина пробу для развития окраски оставляют стоять на 20 минут, после чего колориметрируют.
При дальнейшем стоянии окраска не изменяется.
Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр), в кювете толщиной 0,5 см против воды. Из показателей, полученных при колориметрировании общего и «прямого» билирубина, вычитают показатель контроля.
Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и «прямого» билирубина. Для определения уровня «непрямого» билирубина вычитают из показателя общего его содержания показатель «прямого» билирубина.
