2015-04-30
4897
Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших дозах (8-20 мкмоль/л), причем 75% из них составляет билирубин, связанный белками (нерастворимый) (5,7-15 мкмоль/л) и 25% «прямой» билирубин (2-5 мкмоль/л). При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия, концентрация билирубина повышается.
Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубин-диглюкоуронид реагирует с диазосмесью непосредственно. Связанный с белками билирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива.
Алгоритм определения
В три пробирки (для общего билирубина, «прямого» и для контроля) вводят реактивы согласно таблице:
| № | Реактивы | Общий билирубин | Прямой билирубин | Контроль |
| Сыворотка, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
| Кофеиновый реактив, мл | 1,75 | - | 1,75 | |
| Физ. раствор | - | 1,75 | 0,25 | |
| Диазосмесь, мл | 0,25 | 0,25 | - |
Для определения «прямого» билирубина колориметрирование следует проводить спустя 5-10 минут после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает «непрямой» билирубин.
|
|
|
Для определения общего билирубина пробу для развития окраски оставляют стоять на 20 минут, после чего колориметрируют.
При дальнейшем стоянии окраска не изменяется.
Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр), в кювете толщиной 0,5 см против воды. Из показателей, полученных при колориметрировании общего и «прямого» билирубина, вычитают показатель контроля.
Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и «прямого» билирубина. Для определения уровня «непрямого» билирубина вычитают из показателя общего его содержания показатель «прямого» билирубина.
