Биуретовая реакция

Биуретовая реакция является универсальной на пептидную связь в белках. Вещества, имеющие в своем составе не менее 2-х пептидных связей дают эту реакцию.

Реакция состоит в том, что в щелочной среде в присутствии сернокислой меди белки и полипептиды дают сине-фиолетовое или красно-фиолетовое окрашивание в зависимости от длины пептида вследствие образования комплексных соединений меди с пептидной группой. Продукты гидролиза белков (пептоны) могут давать розовое, красное окрашивание.

Названа эта реакция так потому, что ее дает и биурет, содержащий также пептидные связи. Биурет, имеющий две группировки -СО-NН-, образуется при нагревании сухой мочевины с отщеплением аммиака:

мочевина биурет

Группа, образующая пептидную связь |-СО-NН-|, в щелочной среде присутствует в таутомерной енольной форме:

лактамная лактимная

Щелочная среда приводит к появлению отрицательного заряда вследствие диссоциации ОН - группы, благодаря этому кислород взаимодействует с медью с образованием солеобразной связи, а медь в свою очередь с атомами азота связана через дополнительно координационные связи за счет использования их неподеленных электронных пар. Это ведет к образованию стабильного комплекса. Схематично реакцию можно представить так:

лактимная форма полипептида

Ход работы: В пробирку налить 1мл раствора белка, 1-2 мл 10% NаОН и 1-2 капли раствора сернокислой меди (1%). При взбалтывании появляется фиолетовое окрашивание. Образуется Сu*Na протеинат. Проделать тот же опыт, заменив NаОН чистой водой.