2015-04-30
1143
Принцип метода. Мочевина в присутствии тиосемикарбазида и солей железа образует комплекс с диацетилмонооксимом, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию карбамида в исследуемой биологической жидкости.
Реактивы
1. Раствор трихлоруксусной кислоты, 100 г/л.
2. Водный раствор диацетилмонооксима, 25 г/л.
3. Водный раствор тиосемикарбазида, 2,5 г/л.
4. Раствор хлорного железа. 5 г хлорного железа растворяют в 100 мл дистиллированной воды и подкисляют 1 мл концентрированной серной кислотой. Приготовленный таким образом основной раствор используют для получения рабочего раствора хлорного железа путем добавления к 1 мл первого дистиллированной воды до объёма 100 мл и последующего приливания 8 мл концентрированной серной кислоты и 1 мл раствора ортофосфорной кислоты (850 г/л).
5. Цветной реактив. К 30 мл рабочего раствора хлорного железа добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1 мл раствора диацетилмонооксима (2) и 0,25 мл раствора тиосемикарбазида (3).
6. Стандартный раствор мочевины. 1,0 г мочевины растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Из этого основного раствора готовят рабочий разведением основного в 10 раз. 1 мл стандартного раствора содержит 1 мг мочевины (1 г/л или 16,65 ммоль/л).
|
|
|
Ход определения мочевины в сыворотке крови. В центрифужную пробирку вносят 0,8 мл дистиллированной воды, 0,2 мл сыворотки и 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты, содержимое перемешивают. Через 15-20 мин смесь центрифугируют.
В чистую пробирку вносят 0,5 мл надосадочной жидкости и 5 мл цветного реактива (5). Пробирку выдерживают в кипящей водяной бане 20 мин, затем охлаждают в течение 2-3 мин под водопроводной водой. Измерение абсорбции проводят на ФЭКе при длине волны 500-560 нм (зелёный светофильтр) в кювете с шириной слоя 10 мм.
Учитывают оптическую плотность контрольной пробы, которую ставят так же, как и опытную, но вместо надосадочной жидкости берут 0,5 мл дистиллированной воды.
Стандартную пробу проводят, как и опытную, с той лишь разницей, что вместо сыворотки используют 0,2 мл стандартного раствора мочевины.
Расчёт по формуле:
Х = Аоп: Аст · 16,65;
где Х – концентрация мочевины (ммоль/л),
Аоп - абсорбция опытной пробы;
Аст – абсорбция стандартной пробы;
16,65 – концентрация мочевины (ммоль/л) в стандартном растворе.
Ход определения содержания мочевины в моче. Перед исследованием профильтрованную мочу (взятую из суточного количества) разводят изотоническим раствором в соотношении 1:25. Анализ проводят по способу, описанному выше, с той разницей, что вместо сыворотки берут 0,2 мл разведённой мочи. Параллельно обрабатывают стандартную пробу.
Расчёт содержания мочевины в суточном объёме мочи производят по следующей формуле:
|
|
|
Сст · Аоп · а · К · 16,65
Х = -------------------------------, где
Аст · б · 1000
Х – количество мочевины в суточной моче (ммоль),
Аоп – абсорбция опытной пробы,
Аст – абсорбция стандартной пробы,
Сст – количество мочевины в стандартной пробе,
а – суточное количество мочи (мл),
б – количество мочи (мл), взятое для анализа,
К – коэффициент разведения мочи,
1000 – коэффициент перевода экскреции мочевины из мг в г,
16,65 – коэффициент пересчёта показателей экскреции мочевины из г/сут в ммоль/сут.
В норме содержание мочевины в сыворотке крови – 2,50-8,33 ммоль/л; в моче – 333,0-582,8 ммоль/сут.
