Опыт 3. Сопоставление редокс-потенциалов рибовлавина и метиленового синего

Редокс-потенциалы являются мерой способности молекул обмениваться электронами. Вещество с большим окислительно-восстановительным потенциалом окисляет вещество с меньшим окислительно-восстановительным потенциалом. Для оценки редокс-потенциалов используют потенциометрические измерения, а также колориметрический метод, наблюдая изменение окраски специальных редокс-индикаторов в испытуемом растворе. Для каждого индикатора зона перехода связана с характерной для него величиной Е'_о. Например, для метиленового синего (±2 е) Е'_о составляет +0,011 В, у НАД⁺ (±2 е) -0,320 В, у рибофлавина (±2 е) -0,208 В, у цитохрома с (±е) +0,260 В. Сравнивая стандартные редокс-потенциалы этих систем, можно заключить, что метиленовый синий пригоден для выявления восстановленных форм никотинамидных и флавиновых оксидоредуктаз.

В пробирку наливают 0,5 мл воды, 1 каплю раствора рибофлавина и добавляют по каплям раствор метиленового синего до появления синего или зеленовато-синего окрашивания смеси. Бросают в окрашенную смесь кусочек цинка и капают 1 каплю конц. соляной кислоты. Выделяющийся водород начинает снижать редокс-потенциал системы, происходит восстановление метиленового синего и рибофлавина. Отмечают изменение цвета смеси. Какой из компонентов раствора восстанавливается быстрее?

Слабо окрашенную жидкость сливают в другую пробирку и наблюдают за изменением цвета. Водород более не образуется, а остаток его уходит в воздух. Восстановленная форма рибофлавина через метиленовый синий передает электроны и ионы водорода на кислород воздуха. После этого происходит окисление лейкометиленового синего.