double arrow

Цито- и гистохимические методы исследования


При помощи цито- и гистохимических реакций удается не только выявить то или иное химическое соединение, но и установить локализацию вещества в клетках, проследить за изменением его в процессе жизнедеятельности, т.е. изучить обменные процессы. В настоящее время имеются гистохимические методики, позволяющие изучить основные этапы обмена белков, липидов, полисахаридов, активность ряда ферментов, основные неорганические компоненты клеток. К гистохимическим реакциям применимы некоторые основные требования:

1. сохранение строгой прижизненной локализации химического соединения;

2. специфичность и высокая чувствительность реакции;

3. химические реактивы не должны вступать в обменные процессы;

4. проведение контрольных реакций (удаление изучаемого вещества);

5. конечный продукт реакции должен быть окрашен.

Гистохимические реакции дают качественную оценку, в сочетании с цитофотометрическими исследованиями они позволяют определить количество исследуемого компонента.

Выявление ДНК.

1. Метод Фельгена: гидролиз в 1 N растворе HCl для освобождения альдегидных группировок дезоксирибозы (составной части молекулы ДНК). Обработка реактивом Шиффа – фуксинсернистой кислотой – бесцветным соединением, обладающим высокой степенью чувствительности к альдегидам. Соединяясь с фуксинсернистой кислотой, альдегиды переводят ее в осединение, окрашенное в яркий красно-фиолетовый цвет. Реакция специфичная.




2. Метод Браше: окраска пиронином-метиловым зеленым. Сущность метода заключается в избирательном присоединении основных красителей к нуклеиновым кислотам – пиронина к РНК (дает красное окрашивание), метилового зеленого к ДНК (дает зеленое окрашивание). Для контроля РНК перед окрашиванием требуется обработка препаратов рибонуклеазой.

Выявление полисахаридов.

Метод основан на окислении полисахаридов при помощи 0,5%-ного раствора йодной кислоты до высокомолекулярных альдегидных соединений, которые затем выявляются реактивом Шиффа. Полисахариды окрашиваются в яркий красно-фиолетовый цвет. Контроль с амилазой позволяет отдифференцировать от других полисахаридов. Реакция на полисахариды носит название ШИК-реакция (аббревиатура от Шифф-йодная кислота), а метод окраски назван по имени автора – Шабадаша-Мак Мануса-Хочкиса.

Преподаватель кафедры гистологии,

Эмбриологии, цитологии Мустафина Л.Р.







Сейчас читают про: