Задания к лабораторной работе 2

Вариант 1

Исследована кинетика действия глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы азотфиксирующих бактерий Azotobacter beijerinckii.

глюкозо-6-фосфат + НАДФ⁺ ® глюконат-6-фосфат + НАДФН + Н⁺

Получены приведенные ниже данные о зависимости начальной скорости реакции от концентрации глюкозо-6-фосфата

Концентрация Глюкозо-6-фосфат, мМ	Начальная скорость восстановления НАДФ⁺, нмоль/мин
0,375	6,65
0,5	9,25
0,625	10,95
0,75	13,09
0,875	15,45
	17,84
1,25	20,69
1,5	23,80
	29,24
2,5	35,08

Найдите константу Михаэлиса и максимальную скорость реакции методами Лайнуивера-Бэрка, Эди-Хофсти и Хейнса. Сравните полученные результаты.

Вариант 2

Исследовали люциферазную систему ракообразного Cypridina при температуре 15^оС. Начальные скорости реакции определяли, регистрируя количество света, испускаемого в единицу времени (мин) с помощью фотоэлемента. Результаты приведены в таблице:

Количество добавляемого раствора люциферина на 20 мл реакционной смеси, мл	Нач скорость мВ/мин
0,04
0,06
0,08
0,1
0,2
0,4
0,9

Концентрация люциферина в добавляемом растворе 8·10^{-5 М. Найти константу Михаэлиса и максимальную скорость реакции методами Лайнуивера-Бэрка, Эди-Хофсти и Хейнса. Сравнить полученные результаты.}

Вариант 3

Известно, что D-сериндегидратаза из Neuruspora crassaиспользует в качестве кофермента пиридоксальфосфат. Фермент катализирует реакцию: СН₂(ОН)СН(NH₂)COOH ®CH₃COCOOH+NH₃

При исследовании насыщения фермента пиридоксальфосфатом были получены следующие данные:

Скорость образования пировиноградной к-ты, мкмоль/20 мин	0,15	0,2	0,275	0,315	0,34	0,35	0,36
Концентрация пиридоксальфосфата, 10^{-5 М}	0,2	0,4	0,85	1,25	1,7	2,0	8,0

Найти константу Михаэлиса и максимальную скорость реакции методами Лайнуивера-Бэрка, Эди-Хофсти и Хейнса. Сравнить полученные результаты.

Вариант 4

Начальная скорость выделения O2 при действии фермента на субстрат была измерена для ряда концентраций субстрата:

[S], моль/л	0,050	0,017	0,010	0,005	0,002
V, мм³/мин	16,6	12,4	10,1	6,6	3,3

Найти константу Михаэлиса и максимальную скорость реакции методами Лайнуивера-Бэрка, Эди-Хофсти и Хейнса. Сравните полученные результаты.

Вариант 5

Процесс декарбоксилирования глиоксилата митохондриями исследовали по скорости выделения СО₂ для различных концентраций глиоксилата. Найти константу Михаэлиса и максимальную скорость исследуемого процесса методами Лайнуивера-Бэрка, Эди-Хофсти и Хейнса. Сравните полученные результаты.

Концентрация глиоксилата, мМ	Скорость выделения СО₂ (усл.ед.)
	2,5
0,75	2,44
0,6	2,08
0,5	1,89
0,4	1,67
0,33	1,39
0,25	1,02

Вариант 6

Метионин образуется при биосинтезе (Escherichia coli) в результате ферментативного метиллрования гомоцистеина 5-метилтетрагидроптероилтриглутаматом. Образование метионина регистрировали микробиологическим методом. Были получены следующие результаты:

Триглутамат, мкмоль/л	Кол-во образовавшегося метионина, нмоль

12,5
16,7

Вариант 7

При изучении зависимости скорости реакции от концентрации субстрата были получены след. данные. Субстратом служил фенолфталеинглюкуронид; скорость реакции выражали в микрограммах фенолфталеина, освобождаемого за 60 минут при 37^оС. Найти константу Михаэлиса и максимальную скорость реакции методами Лайнуивера-Бэрка, Эди-Хофсти и Хейнса. Сравните полученные результаты.

Концентрация субстрата, мМ	Скорость реакции

	43,6
	50,4

	56,5
	62,1

Вариант 8

Начальная скорость окисления сукцината натрия в фумарат натрия под действием фермента сукциноксидазы была измерена для ряда концентраций субстрата:

[S], моль/л	0,01	0,002	0,001	0,0005	0,00033
V·106, моль/(л·с)	1,17	0,99	0,79	0,62	0,50

Определите константу Михаэлиса и максимальную скорость данной реакции методами Лайнуивера-Бэрка, Эди-Хофсти и Хейнса. Сравните полученные результаты

Вариант 9

Найдите константу Михаэлиса и максимальную скорость каталитического разложения гидроперекиси тетралина по следующим кинетическим данным:

Используя уравнение Михаэлиса-Ментен, найдите значения концентрации субстрата для нескольких значений скорости реакции. По полученным данным рассчитайте максимальную скорость реакции и константу Михаэлиса методами Лайнуивера-Бэрка и Хейнса. Сравните полученные результаты.

Примечание: Для нахождения концентраций субстрата выбрать несколько значений скорости по предложенному графику и записать их в виде массива. Из уравнения Михаэлиса-Ментен выразить значение S через найденные величины V, K_m и V_max. Поскольку полученная формула предполагает действия с векторами, над выражением необходимо поставить знак вектора (панель инструментов Matrix, кнопка с изображением ).