Занятие 5. Дата ______. Тема: «Принципы культивирования бактерий. Выделение и идентификация чистых культур бактерий. Культивирование анаэробов»
Таблица 3. Классификация питательных сред
Группа питательных сред | Жидкие | Плотные |
Основные (простые) | ||
Простые среды | Мясо-пептонный бульон (МПБ) | Мясо-пептонный агар (МПА) |
Специальные (сложные) | ||
А. Сложные специальные | ¨ Сахарный МПБ для стрептококков и др. | ¨ Сахарный МПА ¨ 5% кровяной агар и др. |
Б. Элективныеилиизбирательные (преимущественно растет определенный вид микроорганизмов, другие не растут или растут плохо) | ¨ 1% щелочная пептонная вода для холерного вибриона ¨ 10% желчный бульон для сальмонелл и др. | ¨ Желточно-солевой агар (ЖСА) для стафилококков ¨ Свернутая сыворотка для дифтерийной палочки ¨ Кровяной агар с ванкомицином для бактероидов и др. |
В. Среды обогащения (всегда жидкие; используются для накопления микробов определенного вида. Рост сопутствующей микрофлоры подавляется ингибиторами) | ¨ Селенитовый бульон для дизентерийной палочки ¨ 10% желчный бульон для сальмонелл и др. | ________ |
Г. Дифференциально-диагностические (применяются для первичной дифференциации бактерий преимущественно по биохимическим свойствам, а также для идентификации бактерий) | ¨ Среды Гисса (“пестрый ряд” для определения сахаролитической активности бактерий) | ¨ Среда Эндо ¨ Среда Левина ¨ Среда Плоскирева ¨ Среды Гиса (полужидкие) и др. |
Д. Хромогенные (всегда плотные; применяются для дифференциации бактерий по культуральным свойствам) | ________ | ¨ «УриселектТМ» и др. |
Е. Транспортные (для доставки исследуемого материала в лабораторию) | ¨ Среда Стюарта и др. | ¨ Среда Стюарта (полужидкая) и др. |
Синтетические | ||
-------- | ¨ Среда Сотона |
Протокол “ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ”
|
|
1 ЭТАП. Посев исследуемого материала на чашки Петри с плотной питательной средой (МПА) методом штриха.
Инкубация при37оС в течение 24 часов.
Примечание 1: в том случае, если в исследуемом материале содержится незначительное количество возбудителя, то его предварительно накапливают путем посева материала в жидкую питательную среду (см. среды обогащения), а затем после инкубации при 37оС производят пересев на плотную среду.
Примечание 2: выделение и идентификацию чистой культуры анаэробов производится в анаэробных условиях.
2 ЭТАП. Идентификация выделенной чистой культуры (чистых культур) по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам. Для этого проводят:
а) макро- и микроскопическое исследование колоний, выросших на плотной питательной среде (культуральные свойства);
|
|
б) приготовление мазка из половины колонии каждого вида и окраску препарата по Граму (морфологические и тинкториальные свойства);
Примечание: микроскопия материала из колоний производится также с целью проверки чистоты культуры.
в) пересев оставшейся части колонии на скошенный агар для накопления выделенной чистой культуры.
Инкубация при37оС в течение 24 часов.
Таблица 4. Схема описания колоний
№ | Размеры | Форма | Цвет | Поверхность | Края | Консистенция | Структура | Морфология; Окраска по Граму | Предполагаемый возбудитель |