Таблица 1.
Схема скрининга лекарственных и наркотических веществ из Перечня «токсикологических веществ, подлежащих обязательному судебно-химическому исследованию в судебно-химических лабораториях (отделениях) Государственной службы медицинских судебных экспертиз».
№ п/п | Системы растворителей (пластина) | № зоны пластины с образцами сравнения и исследуемой пробой | Rf | Извл. №1 Вас. | Извл. №2 Нарк. | Извл.№3 Бенз. | Извл. №4 С-О | Детектирующий реагент | Определяемые вещества | |||
к, г | щ, г | к, г | щ, г | щ, г | щ, г | |||||||
Хлороформ ацетон (9:1) (силикагель MERCK 60F254) | 1. Салицил. кислота, Диазепам. 2. Амидопирин, Фенобарбитал, Бензонал. 3. Исслед. проба 4. Исслед. проба | 0,05 0,60 0,20 0,32 0,50 | 1) УФ-свет (254 и 365нм, здесь и далее по тексту), 2) 0,02% р-р дифенилкарбазона в хлороформе ртути, 1%р-р нитрата серебра и раствор сульфата 3) 10% р-р FeCL3, 4) р-в Драгендорфа-Мунье + 20% H2SO4 При отриц. результате: Зона №4 обрабат. р-вом Драгендорфа-Мунье; При положит. результате: Зона №4 элюируется | Могут определятся вещества кислого, нейтрального и слабо-основного характера: Из перечня – барбитураты. салициловая к-та, диазепам, амидопирин, финлепсин. | ||||||||
Хлороформ 70 н-бутанол 40 25% NH4ОН (2мл в бюкс) (силикагель MERCK 60F254) | 1.Фенобарбитал, Циклобарбитал (или Этаминал, Гексенал). 2. Исслед. проба 3. Исслед. проба | 0,40 0,70-0,85 | 0,02% р-р дифенилкарбазона в хлороформе ртути, 1%р-р нитрата серебра и раствор сульфата | Из перечня - барбамил, барбитал, бензонал, циклобарбитал, фенобарбитал, этаминал. | ||||||||
Ацетон 1 Бутанол 2 (силикагель MERCK 60F254, Сорбфил, Merck TLC) | 1. п-аминофенол 2. Исслед. проба 3. Салицил. к-та 4. Исслед. проба 5. Исслед. проба | 0,80 0,50 | Зоны (1-2): 1% р-р a-нафтола в 10% NaOH Зоны (3-5): 10% FeCL3 в 30% CH3COOH | Исключаются из перечня -парацетамол, салициловая кислота. | ||||||||
4-1 | Толуол 45 Ацетон 45 Этанол 7,5 25% NH4ОН 2,5 или Хлороформ 45 Диоксан 47,5 Ацетон 5 25% NH4ОН 2,5 (силикагель MERCK 60F254, Merck TLC) | 1. Атропин (Хинин), Трифтазин, Папаверин, Кокаин* (см.п.9) 2. Финлепсин, Тизерцин 3. Анальгин-гидр. 4. Исслед. проба 5. Исслед. проба | 0,15 0,52 0,70 0,90 0,55 0,75 0,40- 0,70 | УФ-свет; Зоны (1-4): 1) 10% FeCL3, 2) HCLO4, содерж. 3% р-ра NaNO2 0,5%, 3) УФ-свет; 4) р-в Драгендорфа-Мунье, затем 10% р-р H2SO4 При отрицательном результате: Зона №5 обрабат. р-вом Драгендорфа-Мунье, затем 20% р-ром H2SO4 или 1% р-ром NaNO2; При положитительном результате: Зона №5 элюируется | Вещества основного характера: Из перечня - анальгин, амидопирин, финлепсин, аминазин, дипразин, тизерцин, мажептил, трифтазин, сонопакс, димедрол, амитриптилин, бензодиазепины Дополнительно – в-ва основного характера из расширенного перечня | |||||||
4-2 | Толуол 45 Ацетон 45 Этанол 7,5 25% NH4ОН 2,5 или Хлороформ 45 Диоксан 47,5 Ацетон 5 25% NH4ОН 2,5 (силикагель MERCK 60F254, Merck TLC) | 1. Морфин, Кодеин, Промедол. 2. Исслед. проба 3. Исслед. проба* | 0,20 0,35 0,60 | 1) Реактив Марки | Вещества основного характера: Из перечня – кодеин, промедол. * - только для кислого хлороформного извлечения по Стаса-Отто гнилых или эксгумированных объектов. | |||||||
4-3 | Бензол 60 Диоксан 35 25% NH4ОН 5 (Merck TLC, Сорбфил, силикагель MERCK 60F254) | 1. Трифтазин, Амитриптилин. 2. Димедрол, Тизерцин. 3. Аминазин 4. Исслед. проба | 0,25 0,52 0,45 0,65 0,50 | 2) конц. серная кислота | Вещества основного характера: Из перечня – фенотиазины, димедрол, амитриптилин. | |||||||
4-4 | Бензол 9 Этанол 1 Диэтиламин 1 (Merck TLC, Сорбфил) | 1. Эфедрин 2. Исслед. проба | 0,35 | 1) свежеприготовленный 0,5% р-р нингидрина в ацетоне, Т=800С 5мин | Из перечня – эфедрин. Дополнительно – амфетамины. | |||||||
5-1 | Метанол 10 25% NH4ОН 0,15 | 1. Атропин, Эфедрин, Аминазин, Папаверин. 2. Исслед. проба 3. Исслед. проба | 0,22 0,33 0,56 0,72 | 1) свежеприготовленный 0,5% р-р нингидрина в ацетоне, Т=800С 5мин 2) Серная к-та в этаноле (1:9), 3) реактив Драгендорфа-Мунье; 4) 20% H2SO4 | Из перечня – | |||||||
5-2 | Хлороформ 9 Метанол 1 (Сорбфил, Силуфол, Merck TLC) | 1. Кодеин, Азалептин, Кофеин, Диазепам. 2. Анальгин (щел.) 3. Исслед. проба 4. Исслед. проба | 0,24 0,43 0,63 0,72 0,60 | УФ-свет; 1) 10% FeCL3; 2) реактив Драгендорфа-Мунье, 3) 20% H2SO4. | ||||||||
5-3 | Хлороформ 9 Метанол 1 (Сорбфил, Силуфол, Merck TLC) | 1. Анаприлин Кодеин, Димедрол, Папаверин. 2. Промедол 3. Исслед. проба 4. Исслед. проба | 0,14 0,24 0,38 0,72 0,42 | УФ-свет; 1) реактив Марки; 2) обработка водой – производные фенотиазина усиливают окраску | ||||||||
Бензол 60 Диоксан 35 25% NH4ОН 2мл в тигель (Merck TLC, Сорбфил, силикагель MERCK 60F254) | 1. Имизин 2. Исслед. проба 3. Этацизин Тизерцин 4. Исслед. проба 5. Трифтазин Димедрол 6. Исслед. проба | 0,70, 0,90 0,45 0,65 0,25 0,45 | (1-2) зоны – конц. азотная кислота (3-4) зоны – конц. серная кислота (5-6) зоны – 1) HCLO4, содерж. 3% р-ра NaNO2 0,5% 2) реактив Драгендорфа-Мунье, затем 20% р-ром H2SO4 | Вещества основного характера: Из перечня – фенотиазины, димедрол, амитриптилин. | ||||||||
Бензол (Сорбфил, силуфол, Merck TLC) | 1. Бензофеноны: АНБ АХБ АБХБ МХБ 2. Исслед. проба 3. Исслед. проба | 0,15 0,30 0,42 0,65 | Реакция Браттона-Маршалла | При отсутствии АНБ, АХБ, АБХБ и МХБ исключаются из перечня – диазепам, нитразепам, хлордиазепоксид, феназепам, оксазепам | ||||||||
Хлороформ 9 Ацетон 1 затем Этилацетат 17 Метанол 2 25% NH4ОН 1 (Сорбфил, силуфол, Merck TLC) | 1. Морфин, Кодеин (или опий) 2. Исслед. проба 3. Морфин, Кодеин (или опий) 4. Исслед. проба 5. Метадон (если есть в лабор.) 6. Исслед. проба | 0,20; 0,35 0,20; 0,35 0,85 | Зоны(1-2): реактив Марки Зоны(3-4):реактив Фреде Зоны (5-6 с Rf 0,5-1,0): р-в Манделина При отриц. результате: Зона №5 обрабатывается реактивом Манделина на метадон (Rf=0,85). При положит. результате: Зона №5 до Rf=0,5 элюируется. | Из перечня – морфин, кодеин. Дополнительно – метадон | ||||||||
Рекомендуемые ТСХ-системы для дополнительных исследований: | ||||||||||||
Хлороформ 1 Метанол 1 | 1. Кокаин 2. Исслед. проба | 0,55 | 1) Реактив Драгендорфа-Мунье, затем 10% р-р H2SO4 или 1% р-р NaNO2; | Исследование на кокаин при наличии пятна в соответ-ствующей зоне в пункте (4-1). | ||||||||
Ацетон 1 Бутанол 2 или Этилацетат или Бутанол 5 Этанол 1 25% NH4ОН 1 (Сорбфил, Merck TLC) | 1.Анальгин (гидролиз.) 2. Анальгин (щел. извлечение) 3. Амидопирин 4. Исслед. проба 5. Исслед. проба* | 0,4;0,6; 0,7 0,60 0,55 | 1-4 | 1-4 | 1) УФ-свет, 2) 10% FeCL3 в 30% CH3COOH, 3) 10% НСL, Т=1200C 10 мин, 4) 1% р-р K2Cr2O7 в 20% Н2SO4, 5) Драгендорфа-Мунье | (1-2) Производные пиразолона- 5, салициловая кислота, аспирин. (3-4) усиление окраски производных пиразолона-5 * - используется дополнительно при необходимости | ||||||
Хлороформ 9 Метанол 1 (Сорбфил, силуфол, Merck TLC) | 1. Метадон, Димедрол, Папаверин. 2. Исслед. проба | 0,20 0,32 0,65 | 1) реактив Манделина | Дополнительно - метадон | ||||||||
Толуол 50 Ацетон 50 25% NH4ОН 1 (Сорбфил, Merck TLC) | 1.Финлепсин гидр. 2.Лепонекс гидр. 3. Исслед. проба | 0,5-0,85 0,4-0,8 | 1) УФ-свет 2) 1% р-р K2Cr2O7 в 20% Н2SO4, 3) Драгендорфа-Мунье | 1) Лепонекс – основное пятно с гашением флюоресценции (Rf=0,4). Финлепсин – основное пятно с ярко-салатовой флюоресценцией (Rf=0,6). 2) Лепонекс – несколько пятен с окраской от розового до вишневого цвета с Rf от 0,4 до 0,8. Финлепсин – несколько пятен с окраской от синего до сине-зеленого с Rf от 0,5 до 0,85. | ||||||||
Хлороформ 9 Метанол 1 (Сорбфил, силуфол, Merck TLC) | 1. Клофелин гидр. 2. Исслед. проба | 0,3 | 1) УФ-свет 2) 0,3 М КI, затем 0,3 М CuSO4 | Продукт гидролиза клофелина имеет интенсивную флюоресцен-цию в УФ-свете салатового цвета с Rf=0,4. | ||||||||
Сокращения: Вас. - извлечение подкисленной водой по методу Васильевой; Нарк. – извлечение методом гидролиза на опиаты; Бенз. -извлечение методом гидролиза на производные 1,4-бензодиазепина; С-О – извлечение по методу Стаса-Отто; к – извлечение из кислой водной среды; щ – извлечение из щелочной водной среды.
|
|
|
|
|
|
Примечание: щелочное извлечение по методу Васильевой может исследоваться по двум направлениям в зависимости от степени чистоты полученных объектов исследования: первое направление - 4 системы из пункта (4); второе - 3 системы из пункта (5). Используются системы только из пункта (4) или только из пункта (5).
|
|
Приложение 1
Изолирование лекарственных соединений с учетом рН среды, исходя из их физико-химических свойств
№ п/п | Название лекарственного соединения | рК | Изолирование подкисленной водой | Гидролиз на «опиаты» | Гидролиз на 1,4 -БДП рН=6-8 | ||
рН=2 | рН=10-13 | кислое | рН=9 (щелочное) | ||||
Амидопирин | 5,0 | + | + | ||||
Метамизол (анальгин) | + | + | |||||
Ацетилсалициловая кислота | 3,5 | + | + | ||||
4. | Парацетамол (п-аминофенол) | 7,2 | + | + + | + | ||
Салициловая кислота | 3,0; 13,4 | + | + + | ||||
Барбамил | 7,9 | + | + + | ||||
Барбитал | 8,0 | + | + + | ||||
Бензонал | + | ||||||
Циклобарбитал | 7,6 | + | + + | ||||
Фенобарбитал | 7,4 | + | + + | ||||
Этаминал натрий | 8,1 | + | + + | ||||
Морфин | 8; 9,9 | + | + + | ||||
Кодеин | 8,2 | + | + + | ||||
Диацетилморфин (героин) | + | + + по продукту гидролиза | |||||
Промедол | + - | + | |||||
Папаверин | 6,4 | + - | + | + | |||
Атропин | 9,7 | + | |||||
Клофелин | 8,2 | + | |||||
Кокаин | 8,7 | + | |||||
Дифенгидрамин (димедрол) | 9,0 | + | |||||
Финлепсин (карбамазепин) | + | + | + | + | |||
Аминазин | 9,3 | + | |||||
Дипразин | 9,1 | + | |||||
Левомепромазин (тизерцин) | 9,2 | + | |||||
Тиопроперазин (мажептил) | + | ||||||
Трифторперазин (трифтазин) | 8,1 | + | |||||
Тиоридазин (сонапакс) | 9,5 | + | |||||
Имизин и его аналоги | 9,5 | + | |||||
Амитриптилин | 9,4 | + | |||||
Диазепам | 3,3 | + | + | + | |||
Нитразепам | 3,4; 10,8 | + | + | + | |||
Хлордиазепоксид | 4,6 | + | + | + | |||
Феназепам | + | + | + | ||||
Оксазепам | 1,7; 11,6 | + | + | + | |||
Стрихнин | 2,3; 8,0 | + | + | ||||
Хинин | 4; 8,5 | + | + | ||||
Эфедрин | 10,6 | + | |||||
Анаприлин | 9,4 | + | + + |
Приложение 2
Значения Rf в системе растворителей хлороформ-метанол 9:1 (ТС) на пластине TLC Silica gel 60 (Merck) и получаемые окраски с реактивами Либермана, Манделина, Марки и др. для некоторых лекарственных и наркотических веществ
Вещества | Rf | р-в Либермана | р-в Манделина | р-в Марки | дополнительные р-вы |
1 зона | |||||
гексопреналин | 0.0 | Оран-жел | красное | Н2SO4 - оранж | |
изадрин | 0.01 | коричнев. | Корич-фиол | ||
адреналин | 0.01 | Оран-фиолет | FeCl3 - зеленое | ||
сальбутамол | 0.01 | черное | Гол-кор | желтый | Н2SO4 - желтое |
надолол | 0.01 | коричнев. | Корич-красн. | красный | |
мезатон | 0.01 | - | коричнев. | красный | р-р KMnO4 |
атенолол | 0.02 | черное | |||
Талинолол корданум | 0.03 | - | - | - | |
фентоламин | 0.03 | - | голуб-зелен | желтый | |
атропин | 0.03 | красно-оранж. | розовый | ||
псевдоэфедрин | 0.04 | р-р KMnO4 | |||
триметазин | 0.04 | фиолет | желтый | ||
мексилетин | 0.04 | коричнев. | корич-оранж | красный | |
хлорохин | 0.04 | оранж. 1000 | |||
новокаинамид | 0.05 | - | - | - | р-р нингидрина -желтое |
пиндолол | 0.05 | Голуб-зелен | зеленое | желто-корич. | |
эфедрин | 0,05 | р-р нингидрина | |||
церукал | 0.07 | желтое | коричн | ||
дизопирамид | 0.08 | - | - | - | |
метопролол | 0.08 | Красно-кор | Красн-корич | красный | |
циметидин | 0.09 | - | - | - | р-в Несслера - черное |
морфин | 0.09 | черное | Серо-голуб | фиолет | FeCl3-голубой |
амфетамин | 0,09 | красное | - | коричнев. | ФПН -роз. Нинг оранж. |
мезатон | 0.10 | коричнев. | красный | р-р KMnO4 | |
2 зона | |||||
Пропранололанаприлин | 0.10 | зеленый | зеленый | ||
Окспренолол тразикор | 0.11 | черное | серо-фиолет | фиолетов. | УФ 350 |
тимолол | 0.11 | фиолет 1000 | - | - | |
дезипрамин | 0.11 | желто-голуб | голубой | ФПН - голубое переходящее в желтое | |
тубазид | 0.11 | - | - | - | р-в Неслера - черное |
хинин | 0.11 | Н2SO4 - желт, УФ | |||
хинидин | 0.11 | Н2SO4 -:желт, УФ | |||
ремантадин | 0.11 | - | - | - | р-р нингидрина-иолет |
Апрессин гидролазин | 0.11 | ||||
метамфетамин | 0.13 | оранжевый | Драгендорф | ||
Пропафенон ритмонорм | 0.15 | - | - | - | |
перициазин | 0.16 | красный | красный | ||
кодеин | 0.18 | черное | зеленый | фиолетов. | |
стрихнин | 0.19 | фиолетов. | |||
метадон | 0.20 | коричнев. | голубой | - | |
апоморфин | 0.21 | черное | фио-чер | р-в Неслера - черное | |
этилморфин | 0.22 | - | - | - | |
бисептол | 0.22 | желто-корич | оранж | HNO3 - красное | |
имизин | 0.23 | голуб. | голубой | ФПН - голуб | |
тавегил | 0.25 | коричнев. | желто-корич | желт | Н2SO4 - желтое |
этацизин | 0,26 | коричневый | розовое | ||
галоперидол | 0.27 | коричнев. | - | - | |
супрастин | 0.28 | ||||
теофиллин | 0,30 | Фолин-чикальто | |||
3 зона | |||||
трифтазин | 0.30 | красное | красн-корич. | розов | ФПН -оранж. |
тиоридазин | 0.30 | голубой | сер-фио | ||
фетанол | 0.30 | серо-зелен-коричн. | красное | KMnO4 | |
новокаин | 0.31 | - | - | - | нингидрин |
Клофелин (клонидин) | 0.31 | Желт. 1000 | |||
дикаин | 0.32 | Голуб. 1000 | - | - | |
амитриптилин | 0.32 | - | корич-зелен. | корич-оранж. | Серная к-та |
Лоперамид (имодиум) | 0.32 | - | - | - | |
димедрол | 0.33 | корич-оран | желтое | желтое | |
кломипрамин | 0.34 | голубой | голубой | - | Forest: голубой |
тиопроперазин | 0.34 | - | корич-зелен-фиолет. | красное | ФПН - оран. Форест:кр |
никотин | 0.35 | - | - | - | |
лобелин | 0.35 | серое | кр-фиоле | ||
дипразин | 0,35 | зелен-фиолет | фиолетов | ФПН - оранж | |
аминазин | 0,35 | красно-кор | зелен-фиолет | фиолетов | |
нитразепам | 0,36 | ||||
лоразепам | 0,36 | желтое | Серная-желтое | ||
этионамид | 0,36 | - | - | - | Неслер: кор-оранж |
Дипиридамол курантил | 0,37 | - | фиолетов. | оранжев | |
левомепромазин | 0,38 | - | голуб-фиолет | фиолетов | ФПН - фиолет |
протионамид | 0,38 | - | - | - | Неслер: кор-оранж |
азалептин | 0,38 | - | - | - | HNO3 - красн. Серн - желтый |
оксазепам | 0,40 | оранжев | KMnO4 | ||
промедол | 0,41 | кранос-фиол | |||
Но-шпа | 0,42 | корич-зелен | желтое | драгендорф | |
кокаин | 0,47 | - | - | - | П-диметиламиноб.а |
празозин | 0,47 | корич-крас | - | - | |
4 зона | |||||
хлордиазепоксид | 0,50 | желтое | ФПН - желтое | ||
хлорпротиксен | 0,51 | красное | красное | красно-оранж | |
динезин | 0,51 | зелен-фиолет | фиол-коричн | ФПН - оранжевое | |
клоназепам | 0,53 | оранжев. | |||
никетамид | 0,56 | - | - | - | |
финлепсин | 0,56 | - | - | - | |
кофеин | 0,58 | - | - | - | |
циклодол | 0,61 | серо-зелен | серо-фиолет | ||
дибазол | 0,63 | - | - | Драгенд.-розовое | |
кетамин | 0,63 | йодплатинат | |||
коразол | 0,64 | - | - | - | йодплатинат |
Нифедипин (коринфар) | 0,65 | Н2SO4 - оранж | |||
папаверин | 0,65 | черное | серо-зелен | фиолет. | |
френолон | 0,65 | розовое | розовое | ||
трентал | 0,66 | ||||
амиодарон | 0,68 | Кор-желт | желтое | Н2SO4 - желтое | |
бупренорфин | 0,68 | черное | фиолет. | ||
5 зона | |||||
Изоптинверапамил | 0,70 | черное | Желт-зел | ||
Флунитразепам рогипнол | 0,72 | оранжев. | |||
диазепам | 0,73 | желтое | ФПН - желтое | ||
лидокаин | 0,73 | - | - | розовое | |
медазепам (рудотель) | 0,74 | оранж | HNO3 - красный | ||
резерпин | 0,74 | зеленое | Сер-зе-ко | KMnO4 | |
фентанил | 0,74 | - | - | оранжев. | |
циннаризин | 0,78 | - | - | - | |
тетурам | 0,78 | ||||
бромгексин | 0,79 | - | - | - | |
метаквалон | 0,80 | драгендорф |
Величины hRf и реакции некоторых представляющих интерес соединений с аэрозольными реактивами приведены в табл. 2. Рассчитать величину hRf неизвестных соединений и сравнить полученные данные с эталонными величинами.
Общие указания. Бензодиазепины и их метаболиты в ультрафиолетовом свете (366 нм) до обработки колонки (подкисленный экстракт) нитратом ртути, могут обнаруживаться в виде светло-зеленых или желтых пятен. Хинин (часто содержащийся в горьких напитках), карбамазепин и их метаболиты под воздействием ультрафиолетового света (254 и 366 нм) до опрыскивания колонок с соответствующими щелочными экстрактами обнаруживаются в виде флюоресцирующих пятен и, кроме того, вступают в специфические реакции с некоторыми из аэрозольных реактивов.
При анализе контрольного образца следует отметить положение выявляемого при воздействии реактива Mandelin (видимый свет) желто- коричневого штриха вблизи верха пластинки. Цвета, включая обнаруживаемые в ультрафиолетовом свете, и любые временные изменения можно отмечать посредством записей или с помощью цветных карандашей.
Чтобы добиться воспроизводимости результатов хроматографии, следует обратить внимание на факторы: на использование камер, насыщенных парами растворителей, необходимость обеспечить надлежащую крепость концентрированного гидроксида аммония (относительная плотность 0,88, 330 г/л) как в камере, так и в колбе для реактивов. Лучше или приобретать небольшие флаконы (500 мл), или разливать содержимое больших бутылей (2,5 л) с гидроксидом аммония по флаконам емкостью 500 мл (соблюдая осторожность), которые можно хранить плотно закупоренными до момента использования. Нельзя использовать смесь этилацетат: метанол: концентрированного гидроксида аммония в качестве подвижной фазы более пяти раз при комнатных температурах 20— 25 °С (и еще меньшее число раз при более высоких температурах окружающей среды).
Даже при соблюдении всех мер предосторожности неизменно обнаруживается, что хроматографические характеристики экстрактов образцов и чистых соединений различаются. В экстремальных случаях вместо дискретных пятен видны широкие полосы. Это часто бывает обусловлено присутствием полиэтиленгликоля, используемого в качестве наполнителя, например, в капсулах темазепама, и может быть сведено к минимуму путем обратной экстракции кислых или основных соединений в разбавленные основание или кислоту, как описано выше.
Чувствительность
Указать пределы чувствительности для всех рассматриваемых соединений невозможно. Чувствительность анализа зависит от опыта химика-аналитика, эффективности экстракции, плотности пятна, интенсивности хромогенной реакции с аэрозольным реактивом и даже типа силикагеля. Тем не менее, вполне приемлемой представляется пороговая чувствительность на уровне 1 мг/л.
Таблица 2.