Лабораторная работа № 3

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

ВОДОРАСТВОРИМЫХ БЕЛКОВ И ПОЛИПЕПТИДОВ

ФОТОКОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ БИУРЕТОВЫМ МАКРОМЕТОДОМ

Ц е л ь р а б о т ы - определить содержание водорастворимого белка, полипептидов, олигопептидов в растворе или вытяжке из мышечной ткани различных животных организмов.

Метод основан на биуретовой реакции, которая является показателем наличия пептидных связей в соединении.

Диапазон определяемых концентраций белка 0,2…1,0%.

Фотоколориметрирование проводится при длине волны 540 нм, рабочая длина кюветы 1 см. Для концентрации белка меньше 0,2% применяется фотоколориметрический биуретовый микрометод, где используется модифицированный биуретовый реактив Бенедикта.

Оборудование, реактивы:

Фотоколориметр; кюветы; раствор белка сывороточного альбумина стандартный (1%-й); водные вытяжки из мышечной ткани; реактив биуретовый.

Для приготовления биуретового реактива 0,15 г CuSO₄. 5H₂O и 0,6 г NaKC₄H₄O₆. 4H₂O (виннокислый калий или сегнетова соль) растворяют в 50 мл H₂O при энергичном перемешивании,

приливают 30 мл 10%-го раствора NaOH, добавляют 0,1 г KJ, раствор доводят водой до 100 мл.

Порядок выполнения работы:

В чистую пробирку помещают 1 мл раствора водорастворимого белка неизвестной концентрации или вытяжки, добавляют 4 мл биуретового реактива. Пробу перемешивают и оставляют при комнатной температуре на

30 мин, образуется сине-фиолетовый комплекс.

Фотоколориметрирование комплекса проводится при длине волны 540 нм и рабочей длине кюветы 1 см. Сравнивая значения

оптической плотности неизвестного раствора белка (Д) с калибровочным графиком, определяют неизвестную концентрацию раствора белка, делают выводы.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 4

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОДОРАСТВОРИМОГО

БЕЛКА ФОТОКОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ БИУРЕТОВЫМ