Задание 5. Высаливание белков хлористым натрием

Высаливание белков является обратимой реакцией, т.к. осадок белка может вновь растворяться после уменьшения концентрации солей диализом или разведением водой. Глобулины, имеющие больший молекулярный вес, легче подвергаются высаливанию.

Ход работы: В пробирку наливают 2 мл капель раствора белка и прибавляют тонко измельченный порошок хлористого натрия до полного насыщения раствора. Через несколько минут появится осадок глобулинов.

Содержимое пробирки отфильтровывают. В фильтрате остаются альбумины, которые в нейтральных растворах не выпадают даже при полном насыщении NaCl. К фильтрату прибавляют по каплям 1% раствор уксусной кислоты (15-20 капель), в слабо – кислой среде альбумины выпадают в осадок. Через несколько минут альбумин отфильтровывают и проверяют фильтрат на отсутствие белка при помощи биуретовой реакции.

Контрольные вопросы

1.В каких температурных условиях возможно осаждение белков?

2. Чем обусловлены реакции на белки?

3. Что такое обратимое и необратимое осаждение белков?

4. Что такое высаливание и денатурация белков? Какими факторами они могут быть вызваны?

Ферменты – биологические катализаторы

Цель: Ознакомиться с классом ферменты, с классификацией ферментов, с некоторыми методами обнаружения ферментов.

Основу всех жизненных процессов составляют тысячи химических реакций, катализируемых ферментами. Значение ферментов точно и образно определил И.П.Павлов, назвав их "возбудителями жизни". Нарушения в работе ферментов ведут к возникновению тяжелых заболеваний – фенилкетонурия, гликогенозы, галактоземия, тирозинемия или существенному снижению качества жизни – дислипопротеинеми, гемофилия.

Использование ферментов в медицине происходит по четырем направлениям:

· энзимодиагностика,

· энзимотерапия,

· использование ферментов в медицинских технологиях и промышленности.

· применение ингибиторов ферментов

Энзимодиагностика

Энзимодиагностика – это исследование активности ферментов плазмы крови, мочи, слюны с целью диагностики тех или иных заболеваний. Примером может служить фермент лактатдегидрогеназа, определение его активности в плазме крови необходимо при заболеваниях сердца, печени, скелетной мускулатуры. Увеличение активности α-амилазы в плазме крови и моче наблюдается при воспалительных процессах в поджелудочной и слюнных железах.

Энзимотерапия

Энзимотерапия – это использование ферментов в качестве лекарственных средств.

Самыми распространенными ферментативными препаратами являются комплексы ферментов желудочно-кишечного тракта (Фестал, Панзинорм форте, Мезим форте, Энзистал и т.п.), содержащие пепсин, трипсин, амилазу и т.п., и используемые для заместительной терапии при нарушениях переваривания веществ в желудочно-кишечном тракте.

Тканевой фермент гиалуронидаза нужна организму для обратимого изменения проницаемости межклеточного вещества. Лекарственную форму гиалуронидазы – лидазу – вводят для размягчения рубцов, появления подвижности в суставах, рассасывания гематом.

Цитохром с – фермент, участвующий в процессах тканевого дыхания. Его применяют при асфиксии новорожденных, астматических состояниях, сердечной недостаточности, различных видах гепатита и т.п.

Рибонуклеаза и дезоксирибонуклеаза входят в состав глазных капель для лечения вирусных конъюнктивитов. При нанесении на рану они разжижают гной, при ингаляциях уменьшают вязкость слизи, деполимеризуя нуклеиновые кислоты в мокроте.

Трипсин ингалируют при бронхолегочных заболеваниях для разжижения густой и вязкой мокроты.

Фицин используется в фармацевтической промышленности в качестве добавки к зубным пастам для удаления зубного налета.

Коллагеназу применяют для ускорения отторжения некротизированных тканей, для очистки трофических язв.