Иммуноблоттинг (вестернблоттинг) - высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА.
Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их (блоттинг - от англ, blot, пятно) из геля на активированную бумагу (1) или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с "блотами" антигенов*. На эти полоски наносят сыворотку больного (2). Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом (3). Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата (4), изменяющего окраску под действием фермента.
Занятие № 10 Дата_____________________
Тема: Иммунный статус.
Основные вопросы, разбираемые на занятии:
1. Что такое иммунный статус.
2. Что такое иммунная диагностика.
3. Основные показания, характеристики и отличия тестов 1-го и 2-го уровней.
4. Биологические материалы, используемые для иммунодиагностики.
5. Патогенетический принцип оценки функций иммунной системы.
6. Определение термина иммунорегуляторный индекс.
7. Современные методы иммуноанализа.
8. Клиническое значение изменения содержания в крови основных субпопуляций лимфоцитов.
9. Современные подходы к определению функции фагоцитоза
10. Клиническое значение изменения содержания в крови компонентов комплемента.
Иммунный статус - комплекс количественных и функциональных показателей, отражающих конкретное состояние иммунной системы, определяемое с помощью стандартных общепринятых тестов.
Кроме того, выделяют понятие «иммунодиагностика».
Иммунодиагностика - проведение лабораторного и клинического исследований, которые помогают выявить конкретные нарушения в иммунной системе, позволяющие:
1) выявить нарушенное звено в стройной системе функционирования иммунной системы;
2) провести анализ этиологии, патогенеза, прогноза заболевания;
3) выбрать средство иммунокоррекции;
4) провести оценку эффективности проводимой иммунокоррегирующей терапии.
Оценка иммунного статуса слагается из нескольких этапов:
1. Клинико-лабораторный этап, который включает в себя:
- сбор и оценку иммунологического анамнеза (частота инфекционных заболеваний, характер их течения, выраженность температурной реакции, наличие очагов хронической инфекции, реакции на вакцинации или введение лекарственных средств);
- оценку результатов общего клинического анализа крови (содержание гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов);
- выявление с помощью бактериологических, вирусологических и/или серологических исследований бактерионосительства и вирусоносительства.
Лабораторно-иммунологический этап.
На этом этапе в иммунологической лаборатории проводятся исследования, целью которых, собственно, и является качественная и количественная оценка функциональной активности иммунной системы (иммуннокомпетентных клеток). Для этого разработан ряд (набор) тестов, которые делят на тесты 1-го (ориентировочного) и 2-го (аналитического) уровней.