Определение групп крови по системе АВ0

Необходимо: испытуемый, стерильный скарификатор, спирт, эфир, йод, вата, планшеты для определения групп крови, антитела моноклональные анти-А, анти-В и анти-АВ, диагностические жидкие для определения групп крови человека системы АВ0.

Учебно-исследовательская цель работы: определить групповую принадлежность крови в системе АВ0.

Ход работы

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются мышиными гибридами и принадлежат к иммуноглобулинам. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.

Определение группы крови производится на плоскости (на пластине или планшете) или в пробирках в хорошо освещенном помещении при температуре 15–25 ^оС.

1. Нанесите на планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01–0,03 мл).

3. Смешайте кровь с реагентом.

4. Наблюдайте за ходом реакции с цоликлонами при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3–5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

5. Оцените результат реакции. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице 18, где знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – отсутствие агглютинации.

Таблица 18

Результаты реакции агглютинации исследуемой крови

с цоликлонами

Результат реакции с цоликлоном			Исследуемая кровь принадлежит к группе
Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
-	-	-	0(I)
+	-	+	А(II)
-	+	+	В(III)
+	+	+	АВ(IV)

 

6. При положительном результате реакции со всеми тремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости 1 каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе АВ (IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

7. В отчете укажите, с какими из цоликлонов произошла реакция агглютинации эритроцитов, какая группа крови у исследуемого образца.

 

РАБОТА № 2

Определение резус-принадлежности крови человека

Необходимо: испытуемый, стерильный скарификатор, спирт, эфир, йод, вата, планшеты для определения групп крови, анти-D IgM моноклональный реагент для определения резус-принадлежности крови человека.

Учебно-исследовательская цель работы: освоить методику определения групповой принадлежности крови по системе резус-фактор.

Ход работы

Действующим началом цоликлона анти-D антитела Супер являются моноклональные человеческие анти-D антитела, которые секретируются in vitro гетерогибридной клеточной линией.

1. На пластинку со смачиваемой поверхностью (планшет) нанести небольшую каплю реагента (0,1 мл).

2. Рядом поместить маленькую каплю исследуемой крови (0,01–0,05 мл).

3. Легким покачиванием смешайте кровь с реагентом.

4. Покачивайте планшет в течение 20–30 секунд. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10–15 секунд, четко выраженная реакция агглютинации наступает через 30–60 секунд.

5. По наличию или отсутствию аггютинациии сделайте заключение о принадлежности крови по системе резус-фактор.

 

РАБОТА № 3

Виртуальный физиологический эксперимент. Определение групп крови и резус-фактора

Необходимо: персональный компьютер, программа PhysioEx 6.0 for Human Physiology (тема «Blood Analysis»), методические указания по теме «Физиология крови».

Учебно-исследовательская цель работы: выяснить, как проводятся клинические исследования крови: определение групп крови, определение резус-фактора.

Ход работы

1. Определение группы крови.

2. Определение резус-фактора.

 

Вопросы для самоконтроля

1. Как проводится проба на индивидуальную совместимость крови у исследуемого?

2. У матери, имеющей резус-отрицательную кровь, первая беременность привела к резус-конфликту. Почему это могло произойти?

3. Как проводится проба на биологическую совместимость при переливании крови?

4. Какое состояние организма развивается при переливании несовместимой по группе крови?

5. Резус-иммунизация. Что это такое?

6. В каких случаях наблюдается резус-конфликт?

7. В каких случаях развивается гемотрансфузионный шок?

8. Возможен ли конфликт между матерью и плодом по системе АВ0?

9. Где находятся агглютиногены?

10. Где находятся агглютинины?

11. Отец имеет резус-положительную кровь, мать – резус-положительную. У плода резус-фактора нет. Существует ли опасность резус-конфликта между матерью и плодом.

12. Что происходит с эритроцитом после их агглютинации в результате групповой несовместимости?

13. Сколько групп крови в системе АВ0?

14. Какую кровь можно переливать реципиенту с А(II) Rh(-) кровью?

15. Чем система АВ0 отличается от других систем?

16. Назовите этапы переливания крови.

17. Почему резус-конфликт между матерью и плодом более выражен, чем по системе АВ0?

18. Что является системообразующим признаком?

19. Люди с какой группой крови являются универсальными донорами?

20. Люди с какой группой крови являются универсальными реципиентами?

21. Что такое правило разведения, и в каких случаях им можно воспользоваться?

22. При каком условии возникает реакция агглютинации?

23. К какому классу белков относятся агглютинины?

24. Назовите кровезаменители и плазмозаменители.

25. Какие кровозамещающие растворы Вам известны?

26. Сколько систем групп крови известно в настоящее время?

 

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

Выберите один или несколько правильных ответов.

1. При переливании несовместимой крови возникает

1) снижение осмотической резистентности эритроцитов

2) гемотрансфузионный шок

3) повышение онкотического давления

4) замедление СОЭ

2. человеку с I(0) группой крови можно перелить

1) любую кровь

2) кровь IV группы

3) кровь II группы

4) кровь I группы

3. РЕЗУС-АНТИГЕН НАХОДИТСЯ

1) в плазме крови

2) в лейкоцитах

3) в мембране эритроцитов

4) в мембране тромбоцитов

4. АГГЛЮТИНИНЫ СОДЕРЖАТСЯ

1) в эритроцитах

2) в мембране лейкоцитов

3) в мембране тромбоцитов

4) в плазме

5. АГГЛЮТИНОГЕНЫ СОДЕРЖАТСЯ

1) в плазме

2) в мембране эритроцитов

3) в мембране тромбоцитов

4) в мембране лейкоцитов

 

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

Задача № 1. По медицинским показаниям пациенту требуется переливание 200 мл цельной крови. При определении групповой принадлежности крови пациента наблюдалась агглютинация эритроцитов с цоликлоном анти-В и отсутствие агглютинации с цоликлоном анти-А. Определение резус-фактора с помощью цоликлона анти-D-супер показало наличие реакции агглютинации.

1. Определить, к какой группе крови по системе АВО и резус-фактору относится исследуемая кровь?

2. Определить, кровь с какой групповой принадлежностью необходимо перелить в данной ситуации?

Задача № 2. Перед проведением операции у пациента определили групповую и резус-принадлежность крови. При определении групповой принадлежности крови реакция агглютинации наблюдалась с цоликлонами анти-А и анти-В. Определение резус-принадлежности с помощью цоликлона анти-D-супер показало отсутствие реакции агглютинации.

1. Определить, какая групповая принадлежность по системе АВО и Rh у данного пациента,

2. Указать, какую кровь необходимо иметь на случай возможного переливания крови во время операции?

Задача № 3. Женщина с резус-отрицательной кровью беременна резус-положительным плодом. Беременость первая, ребенок родился здоровым. Через несколько месяцев после родов женщине была перелита одногруппная кровь, однако больная погибла при явлениях гематрансфузионного шока.

Указать, что могло явиться причиной смерти.

Задача № 4. В ходе планирования беременности семейной пары установлено, что кровь отца резус-отрицательна, матери – резус-положительна. В ходе наступившей беременности установлено, что плод резус-фактора не имеет.

Определить, существует ли опасность развития резус-конфликта между матерью и плодом?

 

Задача № 5. Пациенту К., 28 лет, по медицинским показаниям необходимо переливание крови. При определении групповой и Rh–принадлежности крови пациента: кровь II (A), Rh (+). Учитывая результат лабораторного анализа, больному было перелито 150 мл крови группы II (A), Rh (+). Однако спустя 40 минут после переливания у больного возникли гемотрансфузионные реакции: повысилась температура до 38,5 °С, дыхание и пульс участились, появилась одышка, озноб, головная боль, боли в пояснице; АД =160/100 мм рт. ст.

Указать, что могло явиться причиной такой реакции.

ЗАНЯТИЕ № 4