С помощью коагуляционных методов

Определение гепарина

С помощью хромогенных субстратов

Синтетические субстраты применяются для определения гепарина, особенно при использова­нии низкомолекулярного гепарина (НМГ). Гепа­рин определяется опосредованно: используется его способность усиливать комплексообразование ф.Ха или тромбина с антитромбином и тем самым подавлять активность этих протеаз, после чего оп­ределяется их остаточная активность (рис. 110). Тест с определением остаточной активности ф.Ха («анти-Ха-активность») применяется при контро­ле за лечением короткоцепочечным фракциони­рованным гепарином, который обладает большей тропностью к ф.Ха, чем к тромбину. Кроме того, ф.Ха - относительно стабильный фермент, поэто­му тест с использованием этого фактора техни­чески более надежный, чем тест с активным тром­бином.

Тест может выполняться в разных модифи­кациях: как кинетический метод, определение по начальной скорости или метод по конечной точке. В некоторых тестах используется насы­щающая концентрация AT, тогда тест обозна­чается как «общий гепарин», в других - исполь-

зуется эндогенный AT пробы, в этих случаях тест обозначается как набор для определения комплекса гепарин-АТ, или «активный гепа­рин». Определение гепарина с использованием хромогенных субстратов легко адаптируется для автоматических биохимических анализато­ров. На результаты теста с хромогенными суб­стратами не оказывают влияния продукты дег­радации фибрина (ПДФ) и повышенное содер­жание ф.VIII, которые меняют результаты при определении АЧТВ.

Для тестов на определение гепарина разра­ботаны и промышленно выпускаются калибра­торы - лиофильно высушенные препараты плаз­мы со стандартным содержанием гепарина. Ка­либраторы должны быть тестированы по стан­дарту ВОЗ, которому придано значение актив­ности 1,0 анти-Ха-Ед/мл. Терапевтический диа­пазон для лечения гепарином рекомендуется в пределах 0,3-0,7 анти-Ха-Ед/мл.

Принцип определения гепарина с использо­ванием коагуляционных тестов подобен таково­му в тестах с хромогенными субстратами. Опре­деление основано на ингибировании свободного ф.Ха на первом этапе. После инкубационного периода выпадение сгустка вызывается добавле­нием реактивов, содержащих фосфолипиды с ад­сорбированными на них фактором V, протром­бином, фибриногеном из бычьей плазмы и СаС1₂ (рис. 111). Автоматизация этого метода затруд­нена, так как сигнал достаточно слабый для оп­тического метода. Тест может выполняться на цельной крови на коагулометрах с механической системой регистрации.

Рис. 110. Принцип определения содержания гепарина с использованием хромогенного субстрата, AT - антитромбин

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Рис. 111. Принцип определения содержания гепарина коагуляционным методом