Культивирование вирусов

В вирусологической практике для репродукции вирусов с диагностическими целями используются организмы чувствительных животных, куриные эмбрионы и культуры клеток, полученные из нормальных и злокачественных клеток людей и животных.
Культивирование вирусов помогает решить ряд теоретически проблем, связанных с изучением особенностей взаимодействия "вирус-клетка". Кроме того, решение целого ряда прикладных задач, связанных с диагностикой и производством препаратов для профилактики вирусных инфекций невозможно без накопления вируссодержащего сырья.

Тема 11. Вирусологические методы исследования.

Содержание:

• Лабораторные методы диагностики вирусных инфекций.
• Практическое применение бактериофагов

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Различные инфекции могут проявляться в организме больного в очень сходных симптомах, и в тоже время клиническая картина инфекции, вызванная определенным вирусом, может быть весьма разнообразной по своей симптоматике.
Определить возбудителя, особенно при тяжелых заболеваниях, важно и для прогноза дальнейшего течения болезни, установления ее отличий от неинфекционных заболеваний со сходными симптомами и выбора правильного способа лечения. Быстрая лабораторная диагностика позволяет провести неотложные и правильные противоэпидемические мероприятия и обнаружить источник вирусной инфекции.

Лабораторные методы при диагностике вирусных инфекций включают:

• выделение и идентификацию возбудителя;
• обнаружение и определение титров противовирусных антител;
• обнаружение антигенов вирусов в образцах исследуемого материала;
• микроскопическое исследование препаратов исследуемого материала.

Забор материала. При заборе материала для исследований необходимо выполнять следующие условия:

• образцы следует отбирать как можно раньше либо с учетом ритма циркуляции возбудителя;
• материал следует отбирать в объеме, достаточном для всего комплекса исследований;
• образцы следует доставлять в лабораторию незамедлительно (!), при относительно кратковременной транспортировке (не более 5 сут) образцы сохраняют на льду, при более длительной - при температуре -50°С.

Выделение и культивирование вирусов

Вирусы размножаются только в живых клетках. В лаборатории их культивируют в культурах клеток, куриных эмбрионах или организмах чувствительных животных.

Для диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:

• Вирусоcкопический.
• Иммунной электронной микроскопии.
• Вирусологический.
• Серологический.
• Иммунофлюоресцентный.
• Биологический.
• Использование ДНК-(РНК)-зондов.
• Цепная полимеразная реакция.

Рис. 1. Для лабораторной диагностики вирусных инфекций чаще используют серологические методы исследования.

Идентификация вирусов

Идентификацию вирусов проводят качественным и количественным определением вирусов, по морфологии вирусов и с помощью серологических методов.

Рис. 2. Герпесвирус (слева), вирус гепатита В (справа) электронная микроскопия.

Рис. 3. Вирус гриппа (слева), вирус иммунодефицита человека (справа) электронная микроскопия.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ

В практической работе фаги применяют для:

• фаготипирования бактерий, т.е. определения фаготипа по лизису штаммов бактерий одного и того же вида типоспецифическими фагами, что важно для маркировки исследуемых при эпидемиологическом анализе заболеваний с целью установления их видовой принадлежности;
• фагодиагностики, заключающейся в выделении фага из организма больного (например, из испражнений), что косвенно свидетельствует о наличии в материале соответствующих микроорганизмов;
• фагопрофилактики - предупреждения некоторых заболеваний (например, дизентерии) среди лиц, находящихся в эпидемическом очаге;
• фаготерапии - лечения некоторых инфекционных заболеваний, вызванных, например, шигеллами, протеем, стафилококком.

Бактериофаги с целью терапии применяют местно путем аппликации на раневую или ожоговую поверхность, введением в полости (брюшную, плевральную, суставную, мочевой пузырь), через рот, а также ректально.
Соответственно способу применения препараты бактериофагов выпускают в различных лекарственных формах –

• жидком виде,
• таблетках с пектином или кислотоустойчивым покрытием,
• мазях,
• свечах,
• аэрозолях.

Рис. 4. Бактериофаг кишечной палочки (электронная фотография).

Тема 12. Генетика микроорганизмов
и генная инженерия в медицинской микробиологии

Содержание:

· Материальная основа наследственности бактерий.

· Основы изменчивости бактерий.

· Генетика вирусов.

· Механизмы образования лекарственной устойчивости бактерий.

· Генная инженерия в медицинской микробиологии.