Культивирование вирусов в лабораторных условиях

Культивирование вирусов осуществляют для лабора­торной диагностики вирусных заболеваний человека и живот­ных, изготовления живых и инактивированных противовирусных вакцин и сывороток, изучения вопросов патогенеза и иммуни­тета.

Культивирование вирусов в организме естественно воспри­имчивых животных проводят в том случае, если исследователь заинтересован сохранить у вируса исходную патогенность и анти­генные свойства.

Культивирование вирусов в организме лабораторных живот­ных ограничено из-за невосприимчивости животных ко многим

вирусам человека.

Одним из наиболее доступных и удобных методов для выде­ления и культивирования вирусов является использование кури­ных эмбрионов. В куриных эмбрионах способны размножаться вирусы с различным тропизмом, поскольку они содержат четыре субстрата для вируса — амнион, алантоис, хорионаллантоисную мембрану и желточный мешок.

Индикацию вирусов в куриных эмбрионах осуществляют по характеру поражения тела и оболочек эмбриона, а у гемагглюти-нирующих вирусов — в реакции гемагглютинации (склеивания эритроцитов).

Вирусы — это абсолютные внутриклеточные паразиты, ко­торые не способны размножаться ни в одной из бесклеточных питательных сред. В 1949 году Д. Эндерс, Т. Уэллер и Ф. Роббинс сообщили о том, что вирус полиомиелита может размно­жаться и вызывать характерные изменения в культурах не из нервной ткани. Благодаря этому открытию стало возможным выращивание вирусов в клеточных культурах, а также удалось выделить и описать множество ранее неизвестных вирусов. От­крытие аденовирусов, эхо- и риновирусов, разработка вакцин против полиомиелита, кори и краснухи непосредственно связа­ны с использованием культур клеток.

Для культивирования различных вирусов используют первич­ные, диплоидные и перевиваемые клеточные линии.

Первичные культуры клеток получают из измельченных жи­вотных тканей, обрабатывая их протеолитическими ферментами. После отмывки и подсчета клеток суспензию разбавляют средой и дают возможность клеткам прикрепиться к плоской поверхнос­ти стеклянной или пластмассовой посуды. Клетки быстро при­крепляются к поверхности и при оптимальных условиях делятся примерно один раз в день. Первичные или первичнотрипсинизи-рованные культуры клеток осуществляют не более пяти—десяти делений. Для лабораторных исследований и производства вакцин их получают из эмбриональных тканей человека (почек, амниона), обезьян, мышей, куриных эмбрионов.

Диплоидные клеточные культуры представляют собой клетки фибробластов, полученные из эмбрионов человека. Они могут осу­ществлять до 100 делений, сохраняя при этом свой исходный дип-лоидный набор хромосом.

Перевиваемые клеточные линии — это клетки одного типа, способные размножаться in vitrо неопределенно долго, их полу­чают из трансформированных клеток. Часто они теряют сходст­во с теми клетками, от которых произошли, претерпевая в тече­ние длительного культивирования последовательные мутации. Перевиваемые клеточные линии Нер-1, Нер-2, Не1а и КВ ведут н ачало от карцином человека. Эти линии, а также линии, проис­ходящие от клеток тканей мышей (L929), хомячков (ВНК-21) широко используются в экспериментальной вирусологии.

О размножении вирусов в культуре клеток можно судить по датопатическому эффекту — ЦПЭ (см. вкл. IV); образованию в клет-:ах вирусных включений; бляшкам в клеточном монослое; явле­нию гемадсорбции; изменению цвета индикатора питательной среды для клеток.