М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я. Готовят фиксированный препарат-мазок из исследуемого материала, на который наносят люминесцирующую сибиреязвенную сыворотку

Готовят фиксированный препарат-мазок из исследуемого материала, на который наносят люминесцирующую сибиреязвенную сыворотку, содержащую антитела к бациллам сибирской язвы (Bacillus anthracis), меченые флюоресцентным красителем (ФИТЦ – флюоресцеина изотиоцианат). Препарат помещают во влажную камеру, инкубируют 30 мин при 37°С, после чего промывают водой и высушивают. Учет результатов реакции осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа, позволяющего освещать препарат ультрафиолетом, что заставляет флюорохром светиться.

При положительной РИФ – в результате соединения специфических антител, меченых флюорохромом, с антигенами микробных клеток в препарате выявляют светящиеся микроорганизмы, сходные по морфологии, размерам и взаимному расположению с предполагаемым возбудителем.

Бациллы сибирской язвы – это крупные палочки длиной до 7-8 мкм, с отрубленными концами, располагающиеся в патологическом материале короткими цепочками, парами или одиночно.

З а д а н и е №4

В анонимный кабинет обратился гражданин Я. с просьбой проверить его на инфицирование ВИЧ. Проведено исследование с применением ИФА. Учесть результаты. Зарисовать механизм реакции. Оформить протокол. Ответить на вопросы:

1. Какой метод диагностики применен?

2. Можно ли на основании ИФА поставить окончательный диагноз?

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Для определения специфических антител используют специальные панели из полистирола, в лунках которых фиксирован инактивированный вирус или его антигены. В лунки вносят сыворотки обследуемых и инкубируют. При этом гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Не прикрепившиеся антитела удаляют промыванием буферным раствором. Затем в лунки вносят антитела против иммуноглобулинов (антител) человека, меченые пероксидазой хрена. Если в исследуемой сыворотке присутствовали искомые антитела, то на данном этапе они, выступая в качестве антигена, прореагируют с мечеными античеловеческими антителами. Добавление после отмывки субстрата (пероксида водорода) и индикатора (хромоген) позволяет учесть результаты реакции. Образование продукта, окрашенного в желто-коричневый цвет, оценивается как положительная реакция.

Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей антиВИЧ – ИФА «+» и сывороткой, заведомо не содержащей анти-ВИЧ – ИФА «-».