Бруцеллез

Возбудители бруцеллеза сельскохозяйственных животных - Brиcel1a mеlitеn­is, Вг. abortus и Вг. sиis - мелкие грамотрицательные бактерии шаровидной, овальной или более удлиненной формы, спор не образуют. По морфологическим признакам и основным биологическим свойствам бруцеллы разных видов разли­чить нельзя.

В первичных посевах из патологического и клинического материала бруцеллы растут медленно, но через 4-5 пересевов адаптируются к питательным средам и обычным условиям выращивания.

Материал для исследования: абортированный плод целиком или его части (желудок с содержимым, печень, селезенка), околоплодная жидкость, плодовые оболочки; молоко, содержимое гигром, абсцессов; от животных, убитых с диаг­ностической целью - паренхиматозные и половые органы, лимфоузлы.

Исследование проводят микроскопически, культурально и при необходимости биологически.

Микроскопия. Мазки из содержимого желудка, полостных экссудатов, печени и селезенки окрашивают по Граму и одному из специальных методов - по Коз­ловскому, Шуляку - Шину, Ганзену, Кюстеру или Степу.

Посевы делают от каждого плода из разных мест содержимого желудка нe менее чем в пять пробирок с бульоном и агаром; из полостных экссудатов, печени м селезенки - в одну пробирку с бульоном и 2-3 с агаром. Если доставлен только желудок, засевают не менее десяти пробирок. из разных участ­ков содержимого в отдельные пробирки с агаром.

Одну часть посевов инкубируют в обычных условиях, а другую (в расчете на рост Вг. abortus) - в эксикаторе, в атмосфере с 5-10% углекислого газа. Эти условия можно создать: а) подачей углекислого газа из баллона или аппа­рата Киппа; б) сжиганием этилового спирта - 2 мл спирта в часовом стекле ставят в эксикатор, зажигают и немедленно закрывают прибор; в). реакцией между 0,48 г бикарбоната натрия и 5 мл 25%-ного раствора серной кислоты (то и другое в расчете на 1 л объема эксикатора); навеску соды в чашке Петри устанавливают в эксикаторе, вливают кислоту и быстро закрывают при бор.

Первичные посевы инкубируют при 37 ос в течение месяца (при отсутствии роста). Первый просмотр делают через 24 ч, а последующие - через 4-5 дней. С появлением роста из культур в бульоне и на агаре делают мазки, микроскопи­руют и делают пересевы на ага.р. Выделенные культуры проверяют микроскопи­чески с применением специальных методов окраски, в пластинчатой РА и в ре­акции иммунофлуоресценции (РИФ). Пластинчатую РА ставят с бруцеллезными монорецепторными сыворотками абортус (бовис) и мелитензис. Антигеном в реакции служит прогретая при 100 ос в течение 10 мин взвесь 1-2-суточной культуры, содержащая 60 единиц мутности по единому стандарту. На обезжи­ренные стекла наносят в 2-3 точки по капле антигена; на одном стекле к взве­сям добавляют по капле сыворотки мелитензис, на другом - сыворотки абортус (бовис); реагенты тщательно перемешивают и просматривают на темном фоне при боковом освещении; агглютинация, появившаяся с одной из сывороток. В первые две минуты, оценивается диагностически положительно; запоздалая реак­ция не учитывается. В описанных реакциях можно дифференцировать только Вг. melitensis биотипов 1 и 3 от Вг. abortus биотипов 1, 2, 3, 6 и 7.

Для РИФ готовят негустые мазки, фиксируют этиловым спиртом 15 мин и окрашивают бруцеллезной флуоресцирующей сывороткой, взятой в рабочем разведении, 30 мин при 37⁰С. Дальнейшую обработку препаратов и микроскопию ведут, как описано в иммунолюминесцентной микроскопии. Положительным результатом следует считать свечение типичных по форме микробов на + + и выше. В РИФ можно точно выявлять возбудителей бруцеллеза, но дифферен­цировать их по видам нельзя.

Биологическое исследование про водят на двух морских свинках, дающих отрицательную пробирочную РА с бруцеллезным антигеном при разведении сыворотки 1:5. Взвесь из органов и содержимого желудка плода вводят под­кожно в дозе 1-2 мл. Через 10, 20 и 30 дней у свинок берут кровь и ставят пробирочную РА с сывороткой, разведенной 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80. Биопробу считают положительной при наличии РА с сывороткой в разведении 1:10.

Реагирующих свинок убивают и делают посевы из паренхиматозных органов и измененных лимфоузлм. При отрицательной РА животных выдерживают до восьми недель, затем убивают и делают высевы из паховых, подчелюстных, шей­ных и гипогастральных лимфоузлов, селезенкИ', печени и костного мозга. Наблю­дение за посевами ведут до 30 дней.