2015-06-10
4717
I. Методы, которые основываются на принципе механического разъединения микроорганизмов:
1. Метод серийных разведений материала в жидкой питательной среде (метод Л. Пастера).
1мл 1мл 1мл 1мл 1мл 1мл
 |  | ||||
 | |||||
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
Смесь
бактерий
по 9 мл МПБ
2. Метод пластинчатых разведений материала (метод Р. Коха).
1мл 1мл 1мл 1мл 1мл 1мл
 |  | |  | ||||||
 |
 |  | ||||||||
 |  |  | |||||||
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
Смесь
бактерий
по 9 мл расплавленного и охлажденного до 50оС МПА
отдельные колонии
Чашки Петри
Метод рассева материала по поверхности твердой питательной среды с помощью шпателя (метод К. Дригальского).
Сплошной рост Отдельные колонии
4. Метод штриховых посевов.
Материал, который содержит микроорганизмы, рассевают параллельными штрихами по поверхности твердой питательной среды с помощью бактериологической петли.
|
|
|
I II
IV III
Чашка Петри
5. Методы выделения чистой культуры из одной клетки с помощью микроскопа и микроманипулятора (получение клонов).
II. Методы, которые основываются на принципе использования биологических особенностей микроорганизмов:
1. Метод выделения подвижных бактерий.
2. Метод выделения термостойких бактерий.
3. Метод выделения анаэробов.
4. Методы выделения кислото- и щелочеустойчивых микроорганизмов.
5.Метод выделения микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам, анилиновым красителям, и др.
6. Методы выделения бактерий на элективных средах.
7. Метод выделения культур путем заражения чувствительных лабораторных животных.
Основные этапы выделения чистой культуры бактерий.
| Этапы | Задачи этапов |
| I Взятие исследуемого материала. | 1.Взять материал, который содержит возбудителя. 2.Сохранить возбудителя в материале. 3.Предотвратить инфицирование себя и окружающих лиц. |
| II Посев материала на твердые питательные среды. | Получить изолированные колонии. |
| III Исследование изолированных колоний: 1. Изучение культуральных свойств (форма, размер, цвет, и др.). 2. Микроскопия препарата, изготов-ленного из микроорганизмов колонии и окрашенных по Граму или другим методом (определение морфологической однородности и однотинкториальности) | Отобрать колонию, подозрительную на колонию патогенных микроорганизмов (на основе изучения культуральных и морфологических свойств) |
| IV Пересев отобранной колонии микроорганизмов на скошенную питательную среду. | Получить чистую культуру. |
| V. Исследование культуры: 1. Изучение культуральных признаков. 2. Микроскопия препарата, изготов-леного из микроорганизмов колонии и окрашенных по Граму или другим методом (определение морфологической однородности и однотинкториальности) | Определить чистоту культуры (признаки чистой культуры - морфологическая однородность и однотинкториальныесть микроорганизмов). |
Чистая культура -это популяция микроорганизмов одного вида, выращенная на стерильной питательной среде.
|
|
|
После выделения чистой культуры определяют вид микроорганизма (идентифицируют).
Основные этапы идентификации (определение видовой принадлежности)
чистой культуры бактерий.
| Этапы | Цель |
| 1. Определить морфологические и тинкториальные свойства (окраска по Граму или другим методом). | Определить вид микроорганизма |
| 2. Определить активную подвижность (методы "раздавленной" или "висячей" капли). | |
| 3. Определить культуральные свойства (характер колоний, характер роста культуры в жидких и на твердых питательных средах). | |
| 4. Определить ферментативные свойства (посев на дифференциально-диагностические среды). | |
| 5. Определить антигенные свойства (провести серологические реакции). | |
| 6. Определить чувствительность культуры к специфическому фагу. | |
| 7. Определить патогенность (инфицирование лабораторных животных). | |
| 8. Определить другие свойства (по необходимости). |
Вид -совокупность микроорганизмов, которые имеют общие морфофизиологические свойства (морфологические, тинкториальные, культуральные, ферментативные, антигенные и др.) и похожий генотип (высокая степень гомологии ДНК, близкое суммарное содержимое пар Г+Ц).
Вид микроорганизмов определяют по их морфологическим, тинкториальным, культуральным, ферментативными, антигенным и другим свойствами.
Задание 1. Начать выделение чистой культуры аэробных бактерий из смеси микроорганизмов.
I II
 |
Термостат
IV III
Смесь МПА
микроорганизмов
Задание 2. Начать выделение чистой культуры анаэробных бактерий из почвы.
I II
Анаэростат Термостат
|
IV III
Суспензия Кровяной МПА
почвы
Вопросы для самоконтроля.
· В чем заключается суть бактериологического метода диагностики инфекционных заболеваний?
· Что такое чистая культура микроорганизмов?
· Какие признаки чистой культуры бактерий?
· С какой целью получают и где применяют чистую культуру микроорганизмов?
· Какие существуют методы посева микроорганизмов с целью получения изолированных колоний?
· На каких принципах основываются методы выделения чистой культуры?
· Какие биологические свойства микроорганизмов положены в основу методов выделения чистых культур бактерий?
· Каковы основные этапы выделения чистой культуры, в чем их суть?
· Какие вы знаете методы создания анаэробных условий для культивирования микроорганизмов?
