Количественное определение оксида углерода (II) в крови

Сущность метода. Все вышеуказанные соединения гемоглобина можно обнаружить по их спектрам поглощения в видимой области от 500 до 600 нм. Спектры поглощения оксигемоглобина и карбоксигемоглобина очень похожи по форме и положению обоих максимумов: они сдвинуты у обоих соединений не более, чем на 1-2 нм и лежат при длине волны (равной 540-541 нм и при  570-571 нм. Спектр поглощения дезоксигемоглобина имеет один максимум поглощения при длине волны 557 нм. При наложении спектральных кривых карбоксигемоглобина и дезоксигемоглобина на одном графике часто наблюдается пересечение кривых в трех изобестических точках при  550, 565 и 579 нм. Изобестические точки – это точки пересечения спектральных кривых, где оптические плотности растворов карбоксигемоглобина, оксигемоглобина и дезоксигемоглобина одинаковы. Изобестические точки удобно использовать в качестве своеобразных «геодезических знаков» по отношению к которым ведется последующий количественный расчет карбоксигемоглобина.

Теоретически нет разницы, какую из трех изобестических точек использовать в расчетных формулах. В данной методике, для расчетов используется первая изобестическая точка при длине волны 550 нм, как более стабильная.

Для количественного спектрофотометрического определения карбоксигемоглобина необходимо устранить «спектральные помехи» от оксигемоглобина, т.е. убрать его вклад в суммарную оптическую плотность исследуемого раствора крови. Это достигается добавлением в измерительную кювету 4-5 мг сильнейшего восстановителя – гидросульфита (дитионита) натрия. При этом оксигемоглобин и метгемоглобин восстанавливается до дезоксигемоглобина, а карбоксигемоглобин с дитионитом натрия не реагирует.

При количественном определении карбоксигемоглобина, как и при любых других спектрофотометрических определениях, для минимизации ошибок желательно, чтобы оптические плотности исследуемых растворов крови лежали в диапазоне 0.2-0.9.