Конкретные примеры использования гель-фильтрации

В препаративных целях (для очистки и анализа):

1. В химических синтезах различных соединений обычно существует необходимость отделения продукта от реагентов. Например, при получении флуоресцентных антител в результате реакции антитела с изотиоцианатом флуоресцеина конъюгированный белок требуется отделить от непрореагировавшего красителя. Это можно сделать при помощи сефадекса, используя гель, в котором крупные молекулы белка выходят с холостым объёмом. Естественно, что непрореагировавший белок не будет при этом отделяться от конъюгированного, однако для методов работы с флуоресцентными антителами это не обязательно.

2. При анализе ферментов или при определении требующихся кофакторов ферментные препараты иногда содержат ингибиторы с низкой молекулярной массой или собственно кофакторы. При изучении некоторых молекул физическими методами в образце могут присутствовать вещества, искажающие результаты. Такие небольшие молекулы легко удалить на геле декстрана или полиакриламида.

3. Иногда подлежащие исследованию небольшие молекулы биополимера имеют в качестве примеси макромолекулы. В этих случаях оказываются полезными декстраны с малыми размерами пор. Так, белки часто требуется освободить от примесей нуклеиновых кислот; это иногда осуществляется с использованием геля агарозы, который задерживает все белки, тогда как нуклеиновые кислоты выходят с холостым объёмом.

В аналитических целях:

1. При изучении метаболизма РНК различные фракции РНК обычно идентифицируют зонным центрифугированием или электрофорезом в полиакриламидном геле. Для этого же можно использовать и гель-фильтрацию в геле агарозы.

2. Для диагностики некоторых заболеваний человека требуется количественно определить различные фракции белка плазмы. Это можно осуществить прямо на геле декстрана. Такая процедура лежит в основе удобного теста на макро- и гиперглобулинемию.

3. Гель-фильтрацию можно применять для изучения связывания между белками и небольшими молекулами либо путем разделения продукта и реагентов, либо с помощью пропускания белка через колонку, уравновешенную небольшими молекулами. Простой расчёт позволяет определить константу связывания [4].