2015-06-26
466
Для приготовления посевного материала производят смыв 72-часовой культуры гриба Asp. niger (на скошенной агаризованной питательной среде №1) или 24-часовой культуры B. subtilis (на скошенной агаризованной питательной среде №3) 10 см3 стерильной водопроводной воды.
Все операции по приготовлению посевного материала продуцента и засеву жидких питательных сред проводят в микробиологическом боксе.
Культивирование продуцента
Исследование влияния условий культивирования микроскопических грибов Asp. niger ибактерий B. subtilis на биосинтез протеолитических ферментов проводят на жидких питательных средах №2 и №4 соответственно.
Для каждой серии экспериментов по изучению влияния условий культивирования на выход протеиназ используют по 3 параллельных повторности (колбы).
2.2.1. Влияние объёма посевного материала на выход протеиназ
В колбы с ватными пробками вместимостью 250 см3, содержащие по 50 см3 стерильной питательной среды пипетками стерильно вносят по 1, 5 и 10% (по объёму) суспензии культуры гриба или бактерий.
|
|
|
2.2.2. Влияние степени аэрации на выход протеиназ
В колбы с ватными пробками, содержащие 25, 50 и 75 см3 стерильной питательной среды стерильно вносят по 5% суспензии культуры гриба или бактерий. Перед постановкой глубинного культивирования грибных и бактериальных продуцентов проводят оценку степени аэрации по сульфитному числу в аналогичных условиях.
2.2.3. Влияние источника азота на выход протеиназ
В качестве источника азота в составе питательных сред используют KNO3; NH4NO3; (NH4)2SO4 или (NH4)2HPO4 в количестве 2%. В колбы с ватными пробками, содержащие 50 см3 стерильной питательной среды стерильно вносят по 2% суспензии культуры гриба или бактерий.
2.2.4. Общие условия культивирования
Колбы помещают на термостатируемую качалку. Культивирование проводят при 28-30 °С и 200-230 об/мин в течение 48 ч. Через каждые 12 ч определяют рН среды, содержание нитратного или аммонийного азота, фосфора, концентрацию биомассы продуцента, а также протеолитическую активность культуральной жидкости.
