Ирф-454

На чистую полированную поверхность змерительной призмы, входящей в рефрактометрический блок, стеклянной палочкой или пипеткой осторожно, не касаясь призмы, нанести 2-3 капли жидкости. Опустить осветительную призму и прижать ее крючком.

Измерения прозрачных жидкостей производят в проходящем свете при открытом окне осветительной призмы (призма открывается за рукоядку на угол» 100⁰), при этом окно измерительной призмы закрыто зеркалом.

Источником света может служить электролампа или дневной свет. Рефрактометр и источник света устанавливают так, чтобы свет падал на входное окно осветительной призмы.

Устанавливают окуляр на отчетливую видимость перекрестия. Поворотом зеркала 6 добиваются наилучшей освещенности шкалы. Вращением маховика1 границу светотени вводят в поле зрения окуляра.

Вращают маховик 3 до исчезновения окраски граничной линии. Наблюдая в окуляр, маховиком 1 наводят границу светотени точно на перекрестке и по шкале показателей преломления снимают отсчет. Индексом для отсчета служит неподвижный вертикальный штрих. Цена деления шкалы 1*10^-3. Целые, десятые, сотые и тысячные доли отсчитывают по шкале, десятитысячные доли оценивают на глаз.

По окончании измерений открывают рефрактометрические блоки и чистой салфеткой или листком фильтровальной бумаги удаляют основное количество жидкости с рабочих поверхностей призм и оправ. Полированную грань измерительной призмы вытирают очень осторожно, без нажима, чтобы не повредить полировку. После этого протирают призмы мягкой салфеткой, смоченной спиртом, эфиром или смесью спирта и эфира, пока поверхность не станет блестящей. Рефрактометрический блок после промывки необходимо подержать некоторое время открытым для просушки.

Порядок выполнения работы:

1. Определяют показатель преломления (n) для раствора белка неизвестной концентрации (или вытяжки из мышечной ткани) с помощью рефрактометра ИРФ-454. Измеряют температуру раствора. Наблюдения и отсчет проводят не менее трех раз и вычисляют среднее арифметическое значение показателя преломления. Используя табличные данные, значение показателя преломления исследуемого раствора вычисляют его концентрацию графически, либо по рефрактометрическому фактору F.

2.Определение концентрации вещества по рефрактометрическому фактору F.

В сухих пробирках готовят два стандартных раствора с различной концентрацией. Измеряют показатели преломления этих растворов. Используя полученные данные, а также значение показателя преломления исследуемого раствора вычисляют рефрактометрический фактор F и концентрацию анализируемого раствора.

3. Определение концентрации вещества методом калибровочного графика.

В сухих пробирках готовят пять разведений стандартных растворов исследуемого раствора и измеряют их показатели преломления:

Стандартный 10%-й раствор, мл 2 4 6 8 10

Вода, мл 8 6 4 2 -

Содержание вещества, % 2 4 6 8 10

n_D

При измерениях нулевую точку рефрактометра устанавливают по дистиллированной воде.

Показатели преломления разведений стандартных растворов определяют, начиная с меньшей концентрации. Используя полученные данные, строят калибровочный график в координатах “показатель преломления - концентрация”. Определив на приборе показатель преломления исследуемого раствора, по графику находят его концентрацию.