Титрования по серенсену

Ц е л ь р а б о т ы - определить количественно азот аминокислот в продукте методом формольного титрования.

Аминокислоты - амфотерные электролиты, содержат одновременно карбоксильные и аминогруппы.

В водных растворах аминокислоты за счет амфотерности образуют внутримолекулярные соли:

NH₂ NH₃⁺

| |

CH₂ – COOH CH₂ – COO^-

Глицин Внутирмолекулярная соль

Без предварительного блокирования аминогрупп непосредственно титровать карбоксильные группы аминокислот невозможно. Для блокировки

a-аминогрупп используется формалин (раствор формальдегида). Формальдегид блокирует a-аминогруппы с образованием метиленовых соединений; основные свойства аминокислот исчезают:

H H H

| | |

R – C - NH₂ + C = O R - C - N = CH₂ + H₂O

| | |

COOH H COOH

Аминокислота Формальдегид Метиленовое

соединение

Карбоксильные группы легко оттировываются щелочью:

R - CH - COOH + KOH R - CH - COOK + H₂O

| |

N = CH₂ N = CH₂

Определяя количество карбоксильных групп титрованием, косвенно можно судить и о содержании аминных групп, так как количество

титруемых карбоксильных групп эквивалентно количеству связанных формальдегидом аминных групп.

Метод формольного титрования позволяет контролировать гидролиз белков рыбы, а также активность протеолитических ферментов рыбного сырья. Для формольного титрования используют нейтрализованный по фенолфталеину формалин (формол). Формалин – 20%-й раствор формальдегида (муравьиного альдегида). Формальдегид всегда содержит примесь муравьиной кислоты, которая образуется при стоянии в результате окисления О₂, поэтому раствор формалина необходимо нейтрализовать. Для этого 10 мл раствора формалина оттитровывают 0,05 н раствором щелочи с 2 каплями раствора фенолфталеина до слабо-розовой окраски.

Оборудование, реактивы:

Ступка; пестик; марля; мешалка; пипетки; колбы; фильтры бумажные; бюретки; ткань рыбы мышечная; ТХУ (20%-й раствор); NaOH (0,1 н раствор); HCl (0,5 н раствор); формалин нейтральный

(35-40%-й раствор); фенолфталеин (1%-й раствор); BaCl₂ (крист.); индикатор - розовая кислота (интервал перехода 6,2-8,0).

Порядок выполнения работы:

В ступке растирают 50 г фарша с 100-150 мл воды; переносят в мерную колбу на 250 мл, доводят объем смеси до 2/3 объема колбы. Смесь взбалтывают в течение 60 мин для интенсивного гидролиза. Объем смеси доводят до метки водой.

Полученную смесь фильтруют через один слой марли, затем через четыре слоя марли.

Отбирают 100 мл фильтрата и помещают в колбу емкостью 200-300 мл. Для осаждения белков в колбу добавляют постепенно небольшими порциями при взбалтывании 25 мл 20%-го раствора трихлоруксусной кислоты. Через 30 мин жидкость фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Отбирают 100 мл фильтрата, прибавляют несколько капель 0,1 н раствора NaOH до резко щелочной реакции (по изменению индикаторной бумажки) и 2 г BaCl₂ для осаждения фосфатов, фильтруют через бумажный фильтр.

Отбирают по 25 мл фильтрата в три колбы. В первую колбу добавляют 10 капель розоловой кислоты (индикатора). Проводят нейтрализацию фильтрата 0,5 н раствором HCl до желтой окраски, фиксируют объем HCl, далее 0,1 н раствором NaOH - до появления слабо-розовой окраски; отмечают объем NaOH.

Две другие колбы используют для титрования. В эти колбы вносят фиксированные объемы 0,5 н раствора HCl и 0,1 н раствор NaOH, прибавляют по 25 мл нейтрализованного формалина и 1 мл

раствора фенолфталеина, титруют 0,1 н раствором NaOH до розовой окраски.

Расчетная формула:

c(N) = 1,4_*b n₁n ₂ * 100,

mn₃n₄

где c(N) - содержание азота аминного, мг%; m = 50 - навеса рыбы, г; n₁₌ 250 - объем разведения, мл; n₂ = 125 - объем фильтрата с добавлением ТХУ, мл; n₃ = 25 - объем фильтрата, взятый для титрования, мл; n₄ = 100 – объем первого фильтрата,

взятый для осаждения ТХУ, мл; b – объем 0,1 н раствора NaOH, пошедшего на титрование 25 мл фильтрата, мл; 1,4 - коэффициент пересчета на азот, соответствующий 1 мл 0,1 н раствора NaOH.

c(N) = 1,4_*b_*250_*125 _* 100 = 1,4*b*25 = 35*b.

25_*50_*100