Полинуклеотидкиназа фага Т4

Данный фермент переносит γ-фосфат с АТФ на 5'ОН-концы ДНК или РНК. Субстратом для него служат одно- или двунитевые молекулы ДНК (РНК) с дефосфорилированными 5'-концами:

При избытке АДФ полинуклеотидкиназа способна замещать 5'-фосфат у одно- или двунитевых молекул ДНК на γ-фосфат АТФ:

Полинуклеотидкиназу используют для мечения 5'-концов фрагментов ДНК при определении последовательности нуклеотидов методом Максама и Гилберта, а также для фосфорилирования синтетических линкеров и других фрагментов ДНК с 5'ОН-концами.

Щелочная фосфатаза Е. coli.

Фосфатазы обладают широкой специфич­ностью - они гидролизуют самые различные эфиры фосфорной кислоты. Ще­лочная фосфатаза из клеток Е. coli ведет гидролиз любых фосфомоноэфиров, включая и полифосфаты, т.е. ей свойственна универсальная фосфомоноэстеразная активность. В генетической инженерии она используется для дефосфорилирования полинуклеотидов на 5'ф- и 3'ф-концах. В однонитевых разрывах ДНК или на концах фрагментов, где фосфатная группа (например, 5'ф) мас­кируется однонитевым 3'ОН-концом комплементарной цепи, реакция идет с трудом. Повышение температуры реакционной среды дестабилизует двунитевую структуру и устраняет отмеченный недостаток.