Организация и обеспечение диагностической деятельности при мониторинге за возбудителем Крымской геморрагической лихорадки

Материалом для исследования служат клинический и полевой материал, штаммы возбудителя КГЛ, в том числе штаммы с атипичными свойствами.

При исследовании клинического, полевого материала и штаммов возбудителя КГЛ, в том числе с атипичными свойствами, используют весь комплекс современных высокотехнологичных методов вирусологического, иммуносерологического и молекулярно-генетического анализа, включая применение экспериментально-лабораторных серий препаратов.

Порядок исследования клинического и полевого материала на КГЛ

Для выделения вируса и выявления маркеров возбудителя от больных людей берут кровь (до 5-х сут от начала клинических проявлений заболевания при посеве на культуры клеток и до 7-х сут – при заражении новорожденных белых мышей при проведении вирусологического исследований и на 10-14-й день – для серологического исследования при выявлении IgM). От умерших для исследования берут пробы легких, печени, селезенки, почек и мозг (головной и спинной).

Специфическая индикация возбудителя КГЛ осуществляется:

- иммуноферментным анализом: для выявления антигена вируса исследуют сыворотку крови, а также суспензии органов;

- полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией: выявление РНК возбудителя КГЛ.

Выделение и идентификация возбудителя КГЛ:

- культивирование вируса ККГЛ в перевиваемых клетках линий Vero-Е6, SW-13 и др. Вирус ККГЛ культивируется в перевиваемых клетках Vero-Е6 без цитопатического эффекта, на перевиваемой культуре клеток аденокарциномы человека SW-13 вирус ККГЛ вызывает цитопатический эффект (ЦПЭ), проявляющийся в виде разрежения монослоя и отслаивания клеток от поверхности. Вирусный антиген накапливается в цитоплазме клеток.

- исследование монослоя зараженных клеток с помощью МФА через 24-48 (72) ч. Вирусный антиген выявляется в цитоплазме клеток в виде светящихся мельчайших зернышек и гранул различной величины, сливающихся в диффузную массу;

- заражение белых мышей-сосунков в головной мозг. Инкубационный период при первичном заражении составляет 5-12 дней. Через 24 ч и 48 ч часть мышей забивают и из мозга готовят мазки-отпечатки для МФА и суспензии - для РНГА. При получении отрицательных результатов исследования этого материала за оставшимися мышами наблюдают еще трое суток, после чего подвергают их мозг такому же исследованию. Модель новорожденных белых мышей более чувствительна, чем культура клеток.

Выявление антител к вирусу ККГЛ в сыворотке (плазме) крови человека.

Серодиагностику заболевания осуществляют с помощью ИФА (выявление IgM и IgG к вирусу ККГЛ). Титр IgG определяют одновременно в парных сыворотках крови.

Порядок взаимодействия лабораторий Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ с Национальным центром верификации диагностической деятельности и Национальным центром, осуществляющим функцию государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора

Выделенные штаммы вируса ККГЛ передают в соответствии с действующими нормативными документами в Национальный центр верификации диагностической деятельности и Национальный центр, осуществляющий функцию государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора.

Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

Порядок и организация лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора

6.2.1. Требования к лабораториям Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора

Лаборатории Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ, требования к обеспечению безопасности работы персонала, порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований, правила ведения документации и требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на КГЛ, аналогичны п. 6.1.1 настоящих МУ.