Загальний аналіз крові

Підрахунок клітин крові. Метод підрахунку абсолютної кількості клітин крові (лейкоцитів, еритроцитів, тромбоцитів) здійснюють при стандартному розведенні крові і в певному об'ємі камери Горяєва (інколи Фукса-Розенталя). Найбільш поширеним є метод розведення крові в пробірках. Камера будь-якого типу - це товсте скло з вигравіруваною сіткою певного розміру.

Для підрахунку кількості еритроцитів у камері Горяєва капілярною піпеткою набирають 0,02 мл крові, кінець піпетки витирають, кров вносять у пробірку з 4 мл 3% розчину натрію хлориду. Заповнюють камеру Горяєва; через дві хвилини при милому збільшенні мікроскопа в 5 великих квадратах (розкреслених на 16 малих), які розміщені по діагоналі, підраховують кількість еритроцитів. Розрахунок кількості еритроцитів в 1 мкл крові здійснюють за формулою:

Х=(а×4000×200)/80

Де: X кількість еритроцитів в 1 мкл крові;

а - кількість еритроцитів у 80 квадратах;

80_це кількість малих квадратів (5x16=80);

200 ступінь розведення крові;

4000 множник, який приводить результат до об'єму 1 мкл кроні.

Для перерахунку в одиниці системи СІ результат множать на 10^б (к-сть клітин в 1 л).

Кількість еритроцитів в крові знижується при застосуванні деяких лікарських препаратів (антибіотиків, анальгетиків, сульфаніламідів).

Для підрахунку кількості лейкоцитів у камері Горяєва капілярною піпеткою набирають 0,02 мл крові, кінець піпетки витирають, кров вносять у пробірку з 0,4 мл 3% розчину оцтової кислоти, підфарбованої метиленовою синькою. Заповнюють камеру Горяєва; через дві хвилини при малому збільшенні мікроскопа в 100 великих-квадратах, що відповідає 1600 малим, підраховують кількість лейкоцитів. Розрахунок кількості лейкоцитів в 1 мкл крові здійснюють за формулою:

Х= (а×4000×20)/1600

Де: X - кількість лейкоцитів в 1 мкл крові;

а - кількість лейкоцитів у 100 великих квадратах;

1600 - кількість малих квадратів;

20 - ступінь розведення крові;

4000- множник, який приводить результат до об'єму 1 мкл крові.

Для перерахунку в систему СІ результат множать на 10^б.

Зниження рівня лейкоцитів у крові може викликати вживання сульфаніламідів, антибіотиків, анальгетиків, протису-домних, антитиреоїдних та інших препаратів.

Для підрахунку кількості тромбоцитів у камері Горяєва капілярною піпеткою набирають 0,02 мл крові, кінець піпетки витирають, кров вносять у пробірку з 4 мл 1 % розчину оксалату амонію. Заповнюють камеру Горяєва; через 5 хвилин у фазовому контрасті при малому збільшенні мікроскопа в 25 великих квадратах (розкреслених на 16 малих) підраховують кількість тромбоцитів. Розрахунок кількості тромбоцитів в 1 мкл крові здійснюють за формулою:

Х= (ах4000х200)/400

Де: X - кількість тромбоцитів в 1 мкл крові;

а - кількість тромбоцитів у 400 малих квадратах (25x16=400);

200 - ступінь розведення крові;

4000 - множник, який приводить результат до об'єму 1 мкл крові.

Для перерахунку в систему СІ результат множать на 10⁶.

Для визначення швидкості осідання еритроцитів (ШОЕ) капіляром Панченкова набирають кров два рази до мітки "К" і кожен раз вносять у пробірку з 5% розчином натрію цитрату (набраного до мітки "Р" цього ж капіляра"), перемішують. Далі самоплином набирають цитратну кров у капіляр Панченкова і ставлять у штатив Панченкова. Показники знімають через 1 годину.

ШОЕ (норма при 20±3 °С):

Коти 0-12 мм/год

Собаки і цуценята 1-13 мм/год

Підвищення:

Будь-які запальні процеси та інфекції, що супроводжуються накопиченням в крові фібриногену, a- і b- глобулінів;

Захворювання, що супроводжуються розпадом (некрозом) тканин (інфаркти, злоякісні новоутворення, і т.д.);

Інтоксикації, отруєння;

Хвороби обміну (цукровий діабет та ін.);

Хвороби нирок, що супроводжуються нефротичним синдромом (гіперальбумінемія);

Захворювання паренхіми печінки, що ведуть до вираженої диспротеинемии;

Вагітність;

Шок, травми, оперативні втручання.

Найбільш значущі підвищення ШОЕ (більше 50 - 80 мм / год) спостерігаються при:

Парапротеїнемічні гемобластози (мієломна хвороба);

Злоякісні новоутворення;

Захворювання сполучної тканини і системні васкуліти.

Зниження - Гемолітична анемія.

Гематокрит (Нt) - об'ємна фракція еритроцитів в цільній крові (співвідношення об'ємів еритроцитів і плазми). Підвищення гематокриту спостерігається при еритроцитозах, новотворах нирок, полікістозі та полінефрозі нирок, зменшенні об'єму циркулюючої плазми (опіки), дегідратації. Гематокрит знижений при анемії, вагітності, гіперпротеїнемії, гіпергідратації.

Норма

Коти 0,3-0,45

Собаки 0,37-0,45

Цуценята 0,22-0,52

Підвищення:

Первинні і вторинні еритроцитоз (підвищення кол-ва еритроцитів);

Дегідратації (захворювання ШКТ, що супроводжуються профузним проносом, блювотою; діабет);

Зменшення об'єму циркулюючої плазми (перитоніт, опікова хвороба)

Зниження:

Анемії;

Підвищення об'єму циркулюючої плазми (серцева та ниркова недостатність, гіперпротеїнемії);

Хронічний запальний процес, травми, голодування, хронічна гиперазотемия, онкологічні захворювання;

Гемодилюція (внутрішньовенне введення рідин, особливо при зниженій функціональній здатності нирок).

Методи фіксації та фарбування препаратів.

Фіксують мазки крові метиловим спиртом - 3 хв або фіксатором-барвником Май-Грюнвальда - 3 хв. Після точної фіксації препарати промивають проточною або дистильованою водою.

Для пофарбування мазків використовують фарбу Романовського, яка продається у готовому вигляді. Готову фарбу Романовського розводять дистильованою водою (рН 7) або буферним розчином (до 100 мл води додають 0,5 мл розчину однозаміщеного фосфату калію (13,614 г в 1 л води) і 0,5 мл розчину двозаміщеного фосфату натрію (17,838 г в 1 л води); рН розчину - 6,8-7,2. Отриману розведену фарбу необхідно від-титрувати на мазках біоматеріалу для встановлення оптимального часу пофарбування препаратів. Орієнтовно через 10-12 хв мазки змивають водою і висушують.

Нефіксовані мазки товстої краплі фарбують, використовуючи фарбу Романовського того ж розведення, що і для пофарбування мазків крові. Експозиція пофарбування 8-10 хв. Відбувається вилуговування еритроцитів. Потім фарбу зливають і на препарати наливають нову порцію фарби Романовського на 30-35 хв. Предметні скла обережно промивають водою і висушують.

Фарбування за Папенгеймом. Мазки фіксують 3 хвилини у фіксаторі-барвнику Май-Грюнвальда (0,5 г еозиновокислого метиленового синього змішують з 200 мл метилового спирту). Препарати промивають водою і наливають на них розведену за титром фарбу Романовського. Через 10-12 хв препарати промивають водою і сушать.

Пофарбування препаратів крові для виявлення базофільної зернистості еритроцитів. Фіксований препарат крові (3-5 хв в метиловому спирті) покривають високим шаром фарби Романовського на 1 год після чого промивають водою і висушують.

Визначення концентрації гемоглобіну. Кольоровий показник.

Концентрацію гемоглобіну (Нb) визначають для діагностики багатьох патологічних станів (анемій, еритремій, вторинних еритроцитозів), оцінки ступеня крововтрат, згущення крові при дегідратації організму, функцій кісткового мозку. Вміст гемоглобіну визначають геміглобінціанідним методом та за допомогою візуального гемоглобінометру Салі. Гемоглобін при взаємодії з червоною кров'яною сіллю окислюється в метгемоглобін, який утворює з ацетонціангідрином зафарбований ціанметгемоглобін (геміглобінціанід), інтенсивність кольору якого прямо пропорційна концентрації гемоглобіну. За допомогою гемометра Салі, при змішуванні крові з соляною кислотою, гемоглобін перетворюється в солянокислий гематин. При цьому колір рідини змінюється з червоного у коричневий. Розчин розводять до кольору стандарту, який відповідає певній концентрації гемоглобіну (в г%). Для перерахунку в г/л кількість гемоглобіну в г% множать на 10 (коефіцієнт перерахунку). При роботі з старим гемометром Салі визначають коефіцієнт поправки.

Нормальна концентрація гемоглобіну в крові

Коти 8-15 г/л

Собаки 120-180 г/л

Цуценята 74-180 г/л