Через бактеріальний фільтр (холодна стерилізація)

Мета роботи: оволодіти навиками стерилізації середовищ через бактеріальні фільтри; навчитися збирати і стерилізувати фільтри.

Матеріали і обладнання: маточні розчини макро- і мікросолей, вітамінів, Fe-хелату, ваги, шпателі, сахароза, мезоінозит, рН-метр, фільтр Зейтца, колба Бунзена, автоклав, ламінар-бокс, насос Камовського, стерильні колби, закриті фольгою, пробірки, мірні піпетки.

ХІД РОБОТИ

1. Зібрати фільтр Зейтца.

1.1. Розгвинтити металевий корпус фільтра.

1.2. В нижню частину корпуса закласти металеву сітку, потім однакового діаметру з корпусом кільце з тонкої гуми, диск із фільтрувального паперу, ультрафільтр, другий диск фільтрувального паперу і гумове кільце.

Мембранний ультрафільтр має блискучу і матову поверхні, при зборці його слід класти матовою поверхнею в сторону сітки.

1.3. Накласти верхню частину корпуса і пригвинтити її до нижньої, але не повністю.

2. Зібраний фільтр Зейтца за допомогою гумової пробки вмонтувати в колбу Бунзена. На бічний відросток колби одягнути вакуумний шланг. Для запобігання забрудненню з повітря у шланг вставити з’єднану з насосом скляну трубку з ватним тампоном.

3. Зібраний і з’єднаний з колбою фільтр Зейтца загорнути в цупкий обгортковий папір або целофан.

4. Простерилізувати фільтр в автоклаві при 1 атм і 120⁰С 30 хв.

5. Після автоклавування гвинти, які з’єднують верхню і нижню частини корпуса, туго загвинтити і для забезпечення більшої герметичності залити місця з’єднання пробки з колбою і фільтром парафіном.

6. Приготувати 100 мл рідкого (без агару)середовища МС (робота 2).

7. Профільтрувати середовище з використанням вакууму (насос Камовського або водоструминний насос).

Фільтрат має повільно скапувати краплинами, якщо ж він стікає швидше, це може свідчити про порушення цілісності фільтра.

Після закінчення фільтрування слід повільно запускати повітря в колбу, інакше ватний тампон засмокчеться всередину і фільтрат буде інфіковано.

8. Послідуючі операції проводити у ламінар-боксі.

Підготувати ламінар-бокс до роботи.

9. Обпалити систему ватним тампоном, змоченим у спирті.

10. У полум’ї спиртівки акуратно від’єднати фільтр Зейтца від колби Бунзена.

11. Обпалити горло колби у полум’ї спиртівки.

12. Перелити фільтрат із колби у стерильну колбу, в якій він буде зберігатися.

13. Обпалити горло колби у полум’ї спиртівки і закрити стерильною фольгою.

Стерилізація рослинного матеріалу