Подсчет количества эритроцитов

В крови содержится в среднем 4,5-5 х 10¹²/л (в 1 мкл - 1 мм³ крови обычно содержится эритроцитов у мужчин 4500000—5000000, у женщин: 4000000—4500000.

Для подсчета форменных элементов кровь, взятую из пальца, разбавляют в специальных смесителях (меланжерах), чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Для подсчета числа эритроцитов пользуются счетной камерой. Каков бы ни был внешний вид камеры, принцип ее устройства один и тот же. На предметном стекле в углублении высотой 0,1мм расположена сетка. В камере Горяева (рис.а), кото­рой чаще всего пользуются, сетка состоит из 225 больших квад­ратов. Из них 25 квадратов дополнительно разделены на 16 ма­леньких. Каждый разделенный квадрат со всех сторон окружен неразделенными, что облегчает счет (рис.б).

Для подсчета форменных элементов кровь разбавляют чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Для разбавления крови при подсчете эритроцитов применяют 3% гипертонический раствор хлорида натрия, в котором эритроциты сморщиваются.

Ход работы:

1. Перед началом работы необходимо разобраться в устройстве сетки счетной камеры. Для этого помещают камеру под микроскопом и сначала на малом, а затем под большим увеличением рассматривают сетку, находят малые квадратики и большие квадраты.

2. В предварительно высушенную чистую коническую пробирку точно отмеривают 4 мл физиологического раствора и осторожно выдувают в нее 0,02 мл капиллярной крови (кровь набирают в капилляр из гемометра Сали). Получается разведение 1:200. Взвесь тщательно перемешивают (пробирочный способ Н.М.Николаева).

3.Выпустив предварительно наружу 1-2 капли, наносят капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стёклышком. На предметное стекло в том месте, где на нем расположена сетка, поместите покровное стекло и тщательно прижмите его большими пальцами рук (рис. 3). До появления ньютоновых колец – окрашенных в цвет радуги полосок. Одну треть содержимого смесителя выпустите на ватку, а следующую каплю вы­дуйте на предметное стекло подпокровное. Поместите предметное стекло на столик микроскопа, найдите при малом увеличении сетку. Затем, установив большое увеличение, произведите подсчет. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении (окуляр х 7, объектив х 40).

Несмотря на перемешивание, эритроциты не совсем равно­мерно распределяются в поле зрения. В этом можно убедиться, если подсчитать количество эритроцитов в нескольких соседних малых квадратах. Чтобы быть уверенным в точности подсчета, обычно эритроциты сосчитывают в 80 малых квадратах (5 больших квадратов, расположенных в разных местах сетки, например по диагонали). Рекомендуется вначале на листе бумаги нарисовать пять больших квадратов, разделить их на 16 маленьких и в каждый маленький квадратик вписать найденное число эритроцитов. Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границах между маленькими квадратиками, руководствуются правилом Егорова: «Относящимся к данному квадратику являются эритроциты, лежащие внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе в данном квадратике, не считаются».

Подсчитав т.о. число эритроцитов (А) в 5 больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадратике А/80. Сторона одного малого квадрата равна 1/20 мм, следовательно, его площадь 1/400 мм². Глубина камеры—0,1 мм, отсюда объем пространства над одним ма­лым квадратом составит 1/400·1/10=1/4000 мм³.Если в объеме над 80 ма­лыми квадратами найде­но А эритроцитов, то на один малый квадрат при­ходится А/80. Это в объеме 1/4000 мм³, Зная, что объем части камеры под одним маленьким квадратиком равен 1/4000 мм³, умножают найденное число на 4000. Получается число эритроцитов в 1 мкл разведенной крови. Умножив на разведение – 200, получают количество эритроцитов в 1 мкл цельной крови. Т.о., формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

где Х - искомое число эритроцитов,

А - число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках.