2017-11-30
1931
Сбор материала проводился в Тверской области, городе Кашин. В исследовании принимали участие жители города Кашин в возрасте от 19 до 62 лет.
Данные о результатах группы крови у доноров города Кашина за 2015 год были получены в Кашинском отделении переливания крови, которое является структурным подразделением Кашинской ЦРБ.
В работе представлены результаты комплексного обследования 160 доноров, из них - 74 (46,25%) мужчины и 86 (53,75%) женщины. Для анализа доноров крови города Кашина было разделено на три возрастные группы, в соответствии с классификацией возрастной структуры населения по З.Г. Френкелю:
• 15-24 года – ранний рабочий возраст;
• 25-44 года – главный рабочий возраст;
• 45-65 лет – средний возраст;
В ходе работы были исследованы возрастные и половые особенности доноров крови города Кашин их группа крови и резус-фактор, дана комплексная оценка состояния здоровья доноров и противопоказания к донорству. Также был проведен сравнительный анализ полученных результатов с должными величинами.
Доноры сдавали кровь и ее компоненты (плазму, тромбоциты) безвозмездно. Число донаций у обследованных варьировало от 1 до 3.
Медицинское обследование донора осуществляется в отделении переливания крови - лечебно-профилактическом учреждении. Медицинское обследование доноров содержит в себе общий для всех видов донорства порядок обследования. Регистрация донора, как при первичном, так и при повторном обращении, осуществляется регистратурой. Регистратурой донор с "Картой донора резерва" или "Картой активного донора" направляется в лабораторию для проведения первичного, до сдачи крови и ее компонентов, клинико-лабораторного исследования крови (исследование на наличие антител к ВИЧ в перечень данных исследований не входит). Далее донор направляется к врачу-трансфузиологу для необходимого обследования, дотестового консультирования по вопросам ВИЧ-инфекции, сбора анамнеза с учетом данных "Анкеты донора" (приложение N 1 к приказу N 364 от 14.09.2001 г.)[9].
В пособии под редакцией А.П.Торгунакова описаны методы определения группы крови и резус-фактора[14].
Методы исследования
Сведения о донациях, медицинских отводах, выявлении инфекционных маркеров получали из медицинской документации и компьютерной базы данных Кашинской ОПК.
В Кашинском ОПК определение группы крови по системе AB0 осуществляется при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а определение в крови резус-фактора с помощью стандартной сыворотки, в которой содержатся активные резус-антитела.
Методика определения группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками:
Прежде чем приступить к работе по определению группы крови, необходимо ознакомиться с этикетками стандартных сывороток всех четырех групп. Затем провести макроскопическую оценку пригодности сывороток. На этикетках имеются следующие сведения:
•учреждение, в котором изготовлена сыворотка; •групповая принадлежность сыворотки с обязательным указанием агглютининов,
•номер серии,
•титр агглютининов, он должен быть не менее 1:32,
•срок годности сыворотки (число, месяц, год),
•наличие цветных полос: у группы 0(I) – полос нет, у группы А(II) – две синие, у группы В(III) – три красные, у группы АВ(IV) – четыре желтые. Стандартные сыворотки выпускаются с определенной цветной маркировкой: I(0) - бесцветная, II(А) - голубая, III(В) - красная, IV(АВ) - желтая. Стандартные сыворотки готовятся на станции переливания крови и поступают в лабораторию в запаянных ампулах помеченных этикеткой, на которой обозначена группа и дата изготовления.
На сухую пластинку, под соответствующие обозначения групп крови, наносят в лунки по одной большой капле (0.1 мл) стандартной сыворотки (титр 1:32) двух серий; капли второй серии сывороток располагают во второй ряд. Всего получается шесть капель.
Сыворотку берут из каждой ампулы своей пипеткой и опускают ее в туже ампулу с сывороткой. Исследуемую кровь, взятую из пальца или пробирки, размещают в виде крупной капли на пластинке справа. Из нее забирают каплю крови величиной в 10 раз меньшую (0.01 мл), чем капля сыворотки. Обычно это делают стеклянной палочкой, погружая ее в каплю исследуемой крови, а затем размещают эту маленькую каплю рядом с каплей стандартной сыворотки.
Перемешивание капель крови с сывороткой производят отдельными для каждой капли стеклянными палочками. После размешивания капель пластинку слегка покачивают, затем оставляют в покое на одну – две минуты, потом снова покачивают. Через пять минут к капле смеси сывороток и эритроцитов, в которых произошла агглютинация, добавляется по одной капле изотонического раствора хлористого натрия для устранения псевдоагглютинации, после чего можно делать заключение о группе крови.
Если агглютинация произошла, то в каплях смеси сывороток и крови видны невооруженным глазом мелкие красные комочки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Если в каплях агглютинация не произошла, то смесь сыворотки и крови остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживаются агглютинатов.
С помощью стандартных сывороток мы устанавливаем наличие или отсутствие в исследуемой крови агглютиногенов А и В. В результате такого исследования возможны четыре различных комбинации положительных и отрицательных реакций (таблица 7):
1.Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, то исследуемая кровь принадлежит к первой группе.
2.Наличие агглютинации с сыворотками первой и третьей групп свидетельствует о принадлежности исследуемой крови ко второй группе
3.Проявление реакции агглютинации с сыворотками первой и второй групп свидетельствует о принадлежности крови к третьей группе.
4.Если сыворотки всех трех групп крови дали реакцию агглютинации, то исследуемая кровь принадлежит к четвертой группе.
Таблица 7
Определение группы крови при помощи стандартных сывороток
| Результат реакции со стандартными сыворотками | Исследуемая кровь принадлежит к группе | ||
| 0αβ(I) | Aβ(II) | Bα(III) | |
| - - | - - | - - | 0(I) |
| + + | - - | + + | A(II) |
| + + | + + | - - | B(III) |
| + + | + + | + + | AB(IV) |
Определение в крови резус-фактора:
Резус-фактор определяется с помощью стандартной сыворотки, в ко-торой содержатся активные резус-антитела. Эта сыворотка готовится из крови лиц, сенсибилизированных к резус-фактору.
Сывороткой антирезус 0(I) группы определяют резус-фактор только в эритроцитах первой группы, сывороткой антирезус А(II) группы – в эритроцитах первой и второй групп, а сывороткой антирезус В(III) группы в эритроцитах первой и третьей группах крови. Сывороткой антирезус группы АВ(IV), специально приготовленной (универсальной), определяют резус фактор в эритроцитах группы АВ(IV) и в других группах крови по системе AB0.
При каждом исследовании на резусную принадлежность необходимо ставить контроль для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус. Для контроля применяют стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты первой или той же группы, что и исследуемая кровь. Кровь для исследования берут, в количестве 5 мл, в обычную про-бирку без стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы, группу крови лица, у которого взята кровь, отделение и дату. После свертывания крови на дне образуется сгусток из эритроцитов, которые и следует брать для исследования.
Стандартный универсальный реагент представляет собой смесь сыворотки АВ(IV) группы крови и 33% раствора полиглюкина в соотношении 2:1. Его приготавливают на СПК. Универсальный реагент не содержит групповых агглютининов (в сыворотке АВ(IV) группы крови их нет), поэтому он может быть использован для определения резус-антигена Д в эритроцитах любой группы крови системы AB0.
Методика проведения реакции:
1. В штатив устанавливают два ряда центрифужных пробирок объемом до 10 мл, по количеству образцов эритроцитов. Дополнительно устанавливают еще две пробирки, для контроля реакции с резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами. Попарно, из первого и второго ряда пробирок, производят надписи фамилии и инициалов лиц, у которых исследуют кровь.
2. Во все пробирки первого ряда и в две контрольные пробирки вносят по две капли стандартного универсального реагента-антирезус; во все пробирки второго ряда вносят по две капли изотонического раствора хлористого натрия и по одной капле 33% раствора полиглюкина;
3. В пробирки первого и второго ряда вносят по одной капле исследуемых эритроцитов; в первую контрольную пробирку вносят одну каплю стандартных резус-положительных эритроцитов, во вторую контрольную пробирку – такую же каплю стандартных резус-отрицательных эритроцитов.
4. Пробирки встряхивают, затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального уровня, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки, что делает реакцию более выраженной.
Определение резус-принадлежности крови только по сыворотке анти-Д считается недостаточным. В случаях резус-отрицательной реакции необходимо дополнительное исследование сыворотками, содержащими анти-тела анти-С и анти-Е. В число резус-отрицательных засчитываются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов.
Иммунологические методы выявления гемотрансмиссивных инфекций:
Метод иммуноферментного анализа, основанный на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью фермента по изменению окраски специфического субстрата, - используется для определения маркеров вирусов иммунодефицита человека, гепатитов В и С и возбудителя сифилиса;
Метод иммунохемилюминесцентного анализа, основанный на выявлении комплекса антиген-антитело при взаимодействии антигенов со специфическими антителами, химически конъюгированными с люминофорами (веществами, способными светиться в ультрафиолетовом свете) с последующим измерением уровня свечения, - используется для определения маркеров вирусов иммунодефицита человека, гепатитов В и С и возбудителя сифилиса;
Метод пассивной гемагглютинации, основанный на способности эритроцитов с адсорбированными растворимыми антигенами агглютинироваться в присутствии специфической иммунной сыворотки с образованием гемагглютинатов, - используется для определения маркеров возбудителя сифилиса;
Метод преципитации, основанный на взаимодействии эквивалентных количеств мелкодисперсных растворимых антигенов (преципитиногенов) с соответствующими антителами (преципитинами) с образованием комплекса антиген-антитело (преципитата) и последующим выпадением данного комплекса в осадок, - используется для выявления неспецифических антител к кардиолипиновому антигену при диагностике сифилиса;
Статистический анализ полученных данных выполняли на персональном компьютере с использованием пакета прикладных программ Microsoft Excel. Был произведен сравнительный анализ распределения групп крови женщин и мужчин доноров в разных возрастных группах.
