Определение концентрации ретикулоцитов

Определение концентрации ретикулоцитов

Ретикулоцит - это молодой эритроцит, только что вышедший из крас­ного костного мозга. При обычной окраске он не имеет отличий от зрелых эритроцитов. Для выявления ретикулоцитов используют специальные мето­ды суправитального (прижизненного) окрашивания. Оснащение

1. 1%-ный раствор бриллиантового крезилового синего в этиловом спирте.

2. Предметное стекло.

3. Шлифовальное стекло для изготовления мазка.

4. Влажная камера, представляющая собой чашку Петри, на дно которой ук­ладывают смоченную водой фильтровальную бумагу.

5. Микроскоп с иммерсионным объективом.

Техника выполнения

1. Каплю краски наносят на сухое обезжиренное в смеси спирта с эфи­ром предметное стекло и размазывают ее шлифовальным стеклом. Дают краске высохнуть. Такие стекла могут быть заготовлены в прок.

2. На приготовленное таким образом стекло, поверх мазка краски, на­носят тонкий мазок крови и немедленно помещают стекло во влажную каме-№

3. Мазок выдерживают во влажной камере 3-5 минут, а затем высуши­вают его на воздухе.

Данная методика окраски ретикулоцитов модифицирована Л.С. Горожани-ным (1967) с целью улучшения качества получаемых мазков. Суть модифи­кации сводится к тому, что краска наносится на стекло в виде капли, после ее высыхания сюда же помещают каплю крови, перемешивают, делают мазок и инкубируют во влажной камере.

4. Мазок исследуют под микроскопом с использованием масляной им­мерсии. Эритроциты имеют желтовато-зеленую окраску, на фоне которой в ретикулоцитах синяя зернисто-сетчатая субстанция (рис.! 1).

5. Производят подсчет ретикулоцитов на 1000 эритроцитов (промилле). Целесообразно вставить в окуляр рамку, ограничивающую поле зрения, что облегчает подсчет.

6. Полученный результат переводят в проценты (%).

Опенка результатов

В норме у взрослых в периферической крови содержится 0,2-1% рети­кулоцитов. Увеличение количества ретикулоцитов (ретикулоцитоз) наблюда­ется при усилении эритропоэза, особенно после кровопотери и при выражен­ном гемолизе. Уменьшение числа ретикулоцитов (ретикулоцитопения) имеет место при угнетении эритропоэза, например, при постгипоксическом эритро-цитозе, а также в условиях патологии костномозговых эритроидных клеток-предшественников.

В течение первых часов жизни количество ретикулоцитов у детей по­вышено и может колебаться в пределах от 0,8-1,3 до 4,2%. Затем этот показа­тель быстро снижается и между 5-м и 7-м днями жизни доходит до мини­мальных цифр. В дальнейшем, если отсутствуют причины для угнетения или стимуляции эритропоэза, концентрация ретикулоцитов в крови детей соот­ветствует уровню взрослых.

Определение концентрации гемоглобина

Определение концентрации гемоглобина

Унифицированным в России и многих других странах является геми-глобинцианидный метод определения гемоглобина крови. Определение ге­моглобина при помощи гемометра Сали (ГС-3) производиться не должно из-за низкой точности (ошибка составляет до20%), но до сих пор используется в некоторых лечебных учреждениях, не имеющих фотоэлектроколориметров или фотоэлектрических гемоглобинометров. Кроме того, данный метод при­годен для использования в полевых условиях.

И. Метод Сали

Принцип этого метода заключается в том, что все виды гемоглобина крови под влиянием соляной кислоты превращается з хлорид гематина (со­лянокислый гематин) бурого цвета, интенсивность окраски которого сравни­вают со стандартом.

Оснащение

1. Гемометр Сали ГС-3 (рис.10), который представляет собой штатив с 3 гнездами. В крайние гнезда вставлены запаянные пробирки со стандартной цветной жидкостью, соответствующей по спектральным характеристикам (цвету) и оптической плотности определенной концентрации хлорида гема­тина. В среднем гнезде находится градуированная пробирка с нижней круго­вой меткой (0,2 мл) и шкалой, которая показывает концентрацию гемоглоби­на в (граммы гемоглобина на 100 мл крови). Задняя стенка штатива за­крыта матовым стеклом.

2.Стеклянная палочка.

3. Пипетка объемом 0,02 мл.

4. 0,1 Н раствор соляной кислоты.

5. Дистиллированная вода.

6. Пипегка глазная.

1. В центральную пробирку гемометра до нижней круговой метки вно­сят 0,1К раствор соляной кислоты.

2. Пипеткой набирают 0,02 мл крови. Тщательно вытирают кончик пи­петки снаружи. Вносят кровь на дно пробирки таким образом, чтобы верхний слой жидкости остался прозрачным. Повторными всасываниями и выдува­ниями промывают пипетку верхним слоем жидкости. Путем осторожного встряхивания содержимое пробирки перемешивают и, засекая время, остав­ляют стоять в течение 5 минут. Вследствие гемолиза и образования хлорида гематина смесь становится прозрачной и буреет.

3. Через 5 минут к исследуемой жидкости добавляют дистиллирован­ную воду по каплям, каждый раз тщательно перемешивая смесь стеклянной палочкой. Разведение заканчивают, когда цвет жидкости сравняется с цветом стандартов. Цвет жидкости и стандартов необходимо сравнить при дневном освещении в проходящем свете, держа гемометр в вытянутой руке на уровне глаз.

4. Определяют, какому делению шкалы соответствует нижний мениск жидкости. Цена деления шкалы соответствует 0,2 г/%.

Концентрацию гемоглобина пересчитывают в граммы на литр (г/л), для чего полученные данные умножают на 10.