Гемиглобинцианидный (циамметгемоглобиновмй) метод

Принцип этого метода заключается в том, что после взаимодействия с трансформирующим раствором, содержащим ацетонциангидрин, гемоглобин окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), который под влиянием CN-ионов образует окрашенный в красный цвет комплекс — цианметгемоглобин (ге-миглобинцианид). Оптическую плотность раствора определяют на универ­сальном или специальном фотоэлектроколориметре (гемоглобинометре).

Оснащение

1. Гемоглобинометр фотоэлектрический типа ГЭ-3.

2. Трансформирующий раствор с ацетонциангидрином.

3. Пипетка объемом 0,02 мл.

4. Пипетка объемом 5 мл.

5. Пробирка.

Т ехника выполнения

1. 0,02 мл крови приливают в 5 мл трансформирующего раствора в пробирки (разведение 1:250) и хорошо перемешивают.

2. Через 10 минут (раствор остается стабильным в течение более 24 часов) измеряют на фотоэлектроколориметре оптическую плотность при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптиче­ского пути 10 мм против холостой пробы трансформирующего раствора или на гемоглобинометре.

3. Концентрацию гемоглобина в «г/л» определяют по калибровочному графику, построенному с использованием стандарта гемиглобинцианида.

Источник ошибок

Отклонения получаемых значений могут быть связаны только с погрешно­стями взятия крови или с неисправностью фотометрической аппаратуры.

Опенка результатов

В норме концентрация гемоглобина в крови составляет: у женщин 120 -145 г/л, у мужчин- 130 - 165 г/л. Снижение концентрации гемоглобина обычно сочетается с эритропенией, а повышение - с эритроцитозом.

Концентрация гемоглобина после рождения составляет 210 г/л (180-240 г/л). Дальнейшая динамика этого показателя соответствует измене­ниям, наблюдающимся со стороны концентрации эритроцитов.

Определение цветового показателя и среднего содержания гемоглобина в эритроците.

Расчетные показатели, характеризующие состояние красной крови

Исходя из данных концентрации эритроцитов и гемоглобина, можно оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. В настоящее время во всех странах принято рассчитывать среднее содержание гемоглобина в эритроците, но нередко пользуются и цветовым (цветным) показателем. Ин­формативность этих двух параметров совпадает.

1. Среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССГЭ) ССГЭ получают, разделив содержание гемоглобина в 1 литре крови на концентрацию эритроцитов в том же объеме крови:

рад

ССГЭ = (пикограммы, пг), где

[Э]

[НЬ] - концентрация гемоглобина в 1л крови (г/л) [Э] - концентрация эритроцитов в 1 л крови (Т/л)

2. Цветовой (цветной) показатель (ЦП)

ЦП является относительным показателем, характеризующим степень насыщения эритроцитов гемоглобином. Вычисляется путем деления полу­ченного ССГЭ на условно нормальное ССГЭ (166,7 г/л: 5 Т/л = 33,3 пг) или непосредственно, исходя из данных концентрации гемоглобина и эритроци­тов, по формуле:

Г*3

ЦП =------ (усл. ед), где

Э*100

Г - концентрация гемоглобина в исследуемой крови (г/л); Э - концентрация эритроцитов в исследуемой крови (Т/л).

Оценка результатов

В норме ССГЭ составляет 28-34 пг, ЦП - 0,85-1,05. На величинах ССГЭ и ЦП основана классическая классификация анемий. Так, при ССГЭ < 28 пг или ЦП <0,85 говорят о гипохромной анемии и гипохромии (гипохромазии) эритроцитов, которая связана с истинным снижением содер­жания гемоглобина в эритроците или с уменьшением его объема. Если ССГЭ >34 пг или ЦП >1,05, то такая анемия носит название гиперхромной. Гипер-хромия (гиперхромазия) эритроцитов обусловлена исключительно увеличе­нием объема эритроцитов, а не повышением концентрации гемоглобина в единице объема клетки. ССГЭ и ЦП не имеют существенной возрастной динамики у здоровых детей.

Определение СОЭ

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) СОЭ - скорость оседания эритроцитов, измеряемая при отстаиваниистабилизированной крови в стандартных условиях и зависящая от изменений

химических и физических свойств крови.

 

Оснащение

1. Аппарат Панченкова (рис. 13), состоящий из специального штатива с гнез­дами и резиновыми прокладками и специальных капилляров. Капилляры представляют собой стеклянные трубки стандартной длины с просветом ка­нала около 1 мм. На стенку капилляра нанесена миллиметровая (!) шкала длиной 100 мм. Верхние деление шкалы отмечено цифрой «0» и буквой «К» (кровь).

2. 2.5%-ный раствор цитрата натрия трехзамещенного.

3. Часовое стекло или предметное стекло с лункой.

Техника выполнения

1. В капилляр набирают 5%-ный раствор цитрата натрия до метки «75» и вы­дувают на часовое стекло.

2. Затем к раствору антикоагулянта добавляют кровь, набираемую в капилляр до метки «0» («К»), перемешивают.

3. Капилляр заполняют полученной смесью до метки «О» («К») и фиксируют в штативе.

4. Через 1 час производят учет СОЭ, определяя, сколько делений шкалы (в мм) занимает слой плазмы, очистившийся в результате оседания эритроци­тов.

Оценка результатов

В норме СОЭ составляет у женщин 2-15 мм/ч, у мужчин - 1-10 мм/час. Величина СОЭ зависит от концентрации эритроцитов (увеличивается при эритропении, уменьшается при эритроцитозе), вязкости крови (понижается при сгущении крови), соотношения различных фракций белков крови (уве­личивается при повышении концентрации бета- и гамма-глобулинов, фибри­ногена). СОЭ увеличивается при беременности (в связи с повышением кон­центраций фибриногена).

У новорожденных наблюдается замедление СОЭ, обусловленное эритроцитозом и низкой концентрацией фибриногена. В дальнейшем значение СОЭ соответствует уровню взрослых.