Частный метод изолирования алкалоидов водой, подкисленной серной кислотой (по В.Ф.Крамаренко)

Схема метода состоит из следующих этапов:

Настаивание измельченного объекта с водой, подкисленной 20% раствором серной кислоты до рН2-3, в течение двух часов. Вода берется в количестве 1:2 по отношению к навеске объекта. Водное извлечение фильтруется. Операция повторяется двукратно.

Очистка водного извлечения от белковых соединений путем насыщения его сульфатом аммония, настаивания в течение часа и фильтрования образовавшегося осадка.

Очистка фильтрата от жиров, смол, пигментов путем экстракции эфиром. Эфирное извлечение отбрасывают.

Подщелачивание водного извлечения 20% раствором гидроксида натрия и экстрагирование веществ основного характера хлороформом при рН=9-10 (трехкратная экстракция), отделение органической фазы и концентрирование полученного извлечения упариванием.

Изолирование алкалоидов из биологического материала частным методом (метод Крамаренко) проводится по следующей схеме:

Влияние различных факторов на экстракцию:

На экстракцию веществ органическими растворителями оказывают влияние различные факторы: природа экстрагируемого вещества, природа экстрагента, число экстракций, объем экстрагента, температура, рН среды, присутствие электролитов в водных растворах, скорость взбалтывания и др.). Число экстракций и объем экстрагента. Чем больше число экстракций, тем выше степень извлечения экстрагируемого вещества. Чем больше объем органической фазы экстрагента, т.е. чем выше отношение Vорг./Vводн., тем больше степень извлечения экстрагируемого вещества. Влияние рН среды на экстракцию. С повышением рН (т.е. с уменьшением концентрации водородных ионов в водном растворе) увеличивается диссоциация кислоты в растворе, что приводит к уменьшению ее недиссоциированных молекул. В результате понижается экстрагируемость слабой кислоты органическими растворителями. Влияние температуры на экстракцию. Изменение температуры влияет на константу распределения экстрагируемого вещества. Это объясняется тем, что при изменении температуры изменяется растворимость экстрагируемых веществ в каждой фазе, а также изменяется взаимная растворимость органической и водной фаз. Причем с изменением температуры растворимость вещества в каждой фазе изменяется неодинаково. При изменении температуры может изменяться диссоциация и ассоциация вещества в соответствующей фазе. Поэтом у при изменении температуры изменяется гидратация (сольватация) и экстрагируемость химических соединений.

 

35.Понятие о скрининге, используемом при проведении судебно-химического исследования. ГЖХ- и ТСХ-скрининг.

СКРИНИНГ – это научно обоснованная система поиска неизвестного яда, когда в процессе последовательных операций поэтапно отсеиваются (или определяются) отдельные группы веществ или индивидуальные вещества. Физико-химические методы анализа: Хроматографические; Спектроскопические; Иммунохимические. Эти методы могут быть использованы в системе как общего, так и частного скрининга. Газожидкостная хроматография (ГЖХ) условием является переведение исследуемого вещества в летучее состояние. Метод используется при анализе барбитуратов, алкалоидов и других лекарственных веществ в качестве общего и частного скринингового. Идентификация веществ проводится по относительным временам удерживания (или индексам удерживания Ковача). Количественное определение – по высоте (площади) пиков исследуемого вещества и вещества, применяемого в качестве внутреннего стандарта. Достоверность исследований повышается при использовании не менее 2 колонок, обладающих различной полярностью. Используемые детекторы – пламенно-ионизационный, масс-селективный. Тонкослойная хроматография (ТСХ) роль неподвижной фазы выполняет тонкий фиксированный слой сорбента (0,1-0,5 мм), содержащий определенное количество воды, нанесенный на пластинку из стекла (алюминиевой фольги, полимера). В качестве сорбентов чаще используется силикагель и окись алюминия. Детектирование (обнаружение) веществ на хроматограмме проводят следующим образом: - визуально, если вещество имеет собственную окраску (дротаверин, клозапин, бензофеноны и др.),- в УФ-свете – для веществ, обладающих флуоресценцией (свечением) или способных поглощать УФ-излучение (темные пятна на флуоресцирующем фоне

 

36.Характеристика методов очистки извлечений от эндогенных веществ, применяемых в химико-токсикологическом анализе.

Необходима очистка исследуемых в-в от соэкстрактивных в-в (примеси белков, продукты их гидролиза) биоматериала. Может быть проведена при подготовки объекта, в процессе изолирования или после него. 1 этап: грубая очистка: 1.удаление механических загрязнений, фильтрованием, центрифугированием; 2. Осаждение примесей при добавлении реагентов (осаждение белков абсолютным спиртом, ацетоном и т.д) При этом возможно соосаждение исходных в-в, что приводит к потери; 3. Изменение состава фаз, введение другого органического растворителя (большие потери в-в) 2 этап: тонкая очистка: 1. Реэкстракция, переведение в-в из одной жидкой фазы в другую при изменении рн р-ра. При этом примеси отделяются от экстрагируемого в-ва з счет не растворимости в используемом экстрагенте. 2. Сублимации- для в-в, способны возгоняться без разложения при нагревании (салициловая, бензойная,барбитураты) 3. Хроматографии- ионообменная, гель-хроматография, адсорбционная.

37.Принципиальная схема химико-токсикологического анализа на наличие лекарственных соединений. Общие реактивы, осаждающие алкалоиды и их синтетические аналоги, значение их для судебно-химического анализа. Реактивы, дающие цветные реакции, их состав, техника проведения реакций.

Схема химико-токсикологического анализа лек.соед.:

1.Изолирование веществ

Общие и частные методы изолирования веществ кислотного и основного характера:

- извлечение подкисленной водой (методы А.А. Васильевой, В.Ф. Крамаренко) и их модификации;

- извлечение амфифильными растворителями: подкисленным спиртом (метод Стаса-Отто), ацетоном;

- извлечение подщелоченной водой (метод П. Валова), органическими растворителями, дистилляцией с водяным паром, сорбционные методы и др.

2.Очистка полученного извлечения от сопутствующих(балластных) вещ-в

Методы очистки веществ кислотного и основного характера, выделяемых из биологического материала:

- экстракционные и реэкстракционные; хроматографические; электрохимические; осаждения и сублимации; комбинированные методы.

3. Идентификация

Общие реактивы, осаждающие алкалоиды:

Танин.

Раствор йода в йодиде калия.

Раствор йодида висмута в йодиде калия BiI₃/KI ил» KBiI₄ (реактив Драгендорфа).

Раствор йодида кадмия в йодиде калия CdI₂/KI ил» K₂CdI₄ (реактив Марме).

Раствор йодида ртути в йодиде калия HgI₂/KI или K₂HgI₄ (реактив Манера).

Фосфорно-молибденовая кислота Н₃РO₄ • 12МоО₃•2Н₂О (реак­тив Зонненшейеа).

Фосфорно-в ольфрамовая кислота Н₃РО₄ • 12WO₃• 2H₂O (реак­тив Шейблера).

Платинохлористоводородная кислота Н₂РtСl₆.