Знакомство с устройством камеры Горяева

ФИЗИОЛОГИЯ КРАСНОЙ КРОВИ

 

Цель: ознакомиться с методиками подсчета эритроцитов и гемоглобина у человека.

Задачи:

1. Определить гематокрит.

2. Определить количество эритроцитов.

3. Определить концентрацию гемоглобина.

4. Рассчитать цветной показатель.

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, Камера Горяева, покровное стекло, 3,5% раствор NaCl, пипетки на объем не менее 5 мл, капилляры Сали, раствор цитрата натрия, центрифуга для определении гематокрита, линейка, трансформирующий раствор, стандартный раствор гемоглобина с известной концентрацией гемоглобина (120г/л), фотоэлектрокалориметр (ФЭК), кюветы толщиной 10 мм и 3 мм.

 

Анализ функций системы крови у человека широко применяется в процессе физиологических исследований в спортивно-медицинской практике для изучения здоровья спортсменов.

При мышечной работе кровь обеспечивает в соответствии с повышением интенсивности обмена веществ значительное усиление дыхательной функции. Это проявляется в увеличении кислородной емкости крови. О ней судят по числу эритроцитов и количеству гемоглобина. Большие нагрузки, вызывающие выраженные изменения кислотно-щелочного равновесия в плазме крови, могут быть причиной временного уменьшения числа эритроцитов в связи с разрушением их оболочек, что стимулирует восстановительные процессы.

 

Работа № 1. Забор крови из пальца

 

Правильное получение капиллярной крови является одним из решающих условий, обеспечивающих точность и воспроизводимость результатов. Общее время, затрачиваемое на взятие крови, не должно превышать 2 - 3 мин. Во взятой крови должны отсутствовать признаки свертывания.

Ход работы

Вымойте руки с мылом в проточной воде, высушите их. Забор крови производите из большого или безымянного пальца левой руки (допустимо получать кровь из любого другого пальца). Берущий кровь должен пользоваться резиновыми перчатками. Кожу подушечки пальца протрите ватным тампоном, смоченным 70 % спиртом, и дождитесь ее высыхания. Левой рукой слегка сдавите мякоть пальца в области предполагаемого укола. В правую руку возьмите стерильный скарификатор, ориентируя его строго перпендикулярно к поверхности кожи в месте укола. Наиболее удобным местом прокола кожи является точка слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. Укол производите на всю глубину острия иглы, рассекая при этом кожу поперек дактилоскопических линий. Первую каплю крови удалите, потому что она содержит случайные примеси, лимфу и поврежденные форменные элементы. Далее забирайте кровь на необходимые анализы. После окончания забора крови к месту прокола приложите ватный тампон, смоченный спиртом или раствором йода. Забор крови из пальца осуществляйте в специальные в каждом случае стеклянные капилляры для стандартизации процесса взятия крови. При этом капилляры предварительно обработайте антикоагулянтом - веществом, препятствующим свертыванию крови - гепарином или раствором лимоннокислого натрия (цитрата натрия).

 

Работа № 2. Определение гематокрита

 

Гематокрит - это показатель, характеризующий соотношение форменных элементов и плазмы крови. Гематокрит - доля объема крови, которую занимают форменные элементы. Определяется с помощью центрифугирования цельной крови в капилляре в специальной центрифуге.

Ход работы

Для определения гематокрита произведите забор крови из пальца (работа № 1) в специальный капилляр для определения гематокрита. Капилляр обязательно обработайте антикоагулянтом - гепарином или раствором цитрата натрия. Капилляр заполните кровью на ⁷/₈ его длины (при заполнении капилляра в него не должны попадать пузырьки воздуха), закупорьте специальной замазкой с того конца, через который брали кровь. Поместите капилляры с кровью в ротор центрифуги таким образом, чтобы закупоренные концы были направлены кнаружи от оси вращения и упирались в резиновую прокладку, центрифугируйте в течение 5 мин. Определите гематокрит по специальной шкале или с помощью линейки. В последнем случае измерьте высоту столбика эритроцитов (В_э) и высоту столбика плазмы (В_п). Рассчитайте гематокрит (как процент форменных элементов от всего объема крови) по формуле:

 

Рекомендации по оформлению протокола работы. Полученные результаты определения гематокрита занесите в протокол опытов, оцените их, исходя из того, что показатели нормы гематокрита для здорового человека: 43% для женщин, 45% - для мужчин. Такое состояние носит название нормоцитемии. Если относительный объем форменных элементов составляет менее 43%, то это носит название олигоцитемии, а если более 45%, то полицитемии.

Увеличение гематокрита наблюдается при эритроцитозе, уменьшение - при эритропении или микроцитозе (уменьшение размера эритроцитов) на фоне неизменной концентрации эритроцитов. Теоретически гематокрит должен увеличиваться при макроцитозе (увеличение размера эритроцитов), но последний наблюдается только на фоне выраженной эритропении.

Новорожденные имеют высокий гематокрит, составляющий в среднем 57 %. Дальнейшая динамика этого показателя соответствует изменениям количества эритроцитов в периферической крови.

 

Знакомство с устройством камеры Горяева

 

Камера Горяева представляет собой специальное устройство для подсчета форменных элементов крови. На ее поверхности нанесена сетка, разделяющая пространство на квадраты: большие и маленькие.

Камера Горяева представляет собой толстое прямоугольное стекло с двумя сетками, выгравированными на его поверхности (рис. 12). Сетки отделены одна от другой поперечной канавкой во избежание затекания жидкости. Двумя глубокими продольными

Рис. 12. Камера Горяева

А – вид сверху (а – маленький квадрат,

б – большой квадрат);

В – вид сбоку; В – сетка

канавками сетки отделены от стеклянных прямоугольных пластинок, к которым притирают шлифованное покровное стекло. Плоскость поверхности этих пластинок находится на 0,1 мм выше плоскости, в которой нанесены сетки. Камера состоит из 225 больших квадратов. Сто квадратов не разлинованы; 25 больших квадратов разделены каждый на 16 малых объемом 1/4000 мкл. Во избежание двукратного подсчета клеток, находящихся на линиях сетки, пользуются правилом буквы «Г»: считаются клетки, относящиеся к данному квадрату и лежащие внутри квадрата и на левой и верхней границе; клетки, пересекающие правую и нижнюю границу, не подсчитываются.