Определение общего количества бактерий группы кишечной палочки - БГКП

Методика. Различные разведения почвен­ной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера ( 1л дистиллиро­ванной воды, 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 10 г лактозы; рН 7,4-7,6; 4 мл 1% водного раствора генцианового фиолетового). Разливают в пробирки с поплавка­ми. Инкубируют при 43°С 48 часов. При получении в средах газообразования и помутнения производят высев петлей на среду Эндо. Отбирают типичные для кишечной палочки колонии, делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При выявлении в мазках Гр- палочек ставят пробу на оксидазу. Если проба отрицательная (изменение окраски на синий цвет) проверяют ферментативные свойства выделенной культуры посевом на полужидкую среду с глюкозой. Появле­ние в среде кислоты и газа подтверждает наличие Е. coli.

Определение наличия Cl. perfringens

Для определения перфрингенс-титра различные разведения почвенной сус­пензии засевают в пробирки со стерильной железосульфитной средой Вильсон-Блера. Инкубация при 43°С 48 часов. Учитывают результаты по образованию черных колоний Cl. perfringens в агаровом столбике среды. Мазки окрашивают по Граму, микроскопируют (Гр+ крупные палочки со спорами овальной формы, центрального или субтерминального расположения), вычисляют перфрингенс-титр (наибольшее разведение посевного материала, посев которого приводит к почерне­нию и разрыву среды в первые 12 часов роста при 43⁰ С).

К работе № 4

Микрофлора рук и предметов окружающей среды

Санитарный надзор за состоянием объектов общественного питания и пище­блоков, в лечебных и детских учреждениях осуществляется взятием смывов с рук обслуживающего персонала, медперсонала, с посуды, поверхности столов и т. д. При взятии смыва с рук пользуются стерильными ватными тампонами, которые перед использованием смачивают в среде Кесслера, содержащейся в пробирке, в которой находится тампон. Смывы делают с обеих рук, тщательно протирая ладони, меж­пальцевые промежутки и подногтевые пространства сначала левой руки, а затем правой.

С исследуемых предметов стерильным ватным тампоном, увлажненным изотоническим раствором NaCl, делают смыв. Тампон помещают в среду Кесслера или втирают в поверхность среды Эндо. Для исследования гладких поверхностей и тканей смывы делают с помощью трафаретов из прово­локи, имеющих площадь 25 см². Посевы выдерживают в термостате при темпера­туре 43° С в течение суток. При наличии брожения в среде Кесслера делают высев на среду Эндо. Колонии, подозрительные на кишечную палочку, подвергают дальнейшей идентификации.

К самостоятельной работе

Санитарно-микробиологическое исследование объектов окружающей среды

В лечебно-профилактических учреждениях

Объектами исследования при проведении бактериологического контроля лечебно-профилактических учреждений являются:

- воздушная среда;

- различные объекты внешней среды;

- хирургический инструментарий;

- шовный материал;

- руки хирургов и кожа операционного поля.

Бактериологическое исследование микробной обсемененности предметов внешней среды предусматривает выявление стафилококка, синегнойной палочки, бактерий группы кишечных палочек и патогенных грибов.

Отбор проб

Взятие смывов производят стерильным ватным тампоном на палочках, вмонтированных в пробирки, или марлевыми салфетками размером 5x5 см. Для увлажнения тампонов в пробирки наливают по 2,0 мл стерильного физиологического раствора.

Для выделения стафилококков посев делают непосредственно на чашку Петри с желточно-солевым агаром, для выделения бактерий группы кишечных палочек — посев на среду Эндо (дальнейшие исследования по соответствующим схемам). Для обнаружения патогенных грибов производят посев на среду Сабуро, наблюдают 5 суток при 21°С. Кроме того, производят посевы в среды накопления — для стафилококков в 6,5% хлористого натрия, для бактерий группы кишечных палочек — в 10-20% желчный бульон. Через сутки инкубирования при 37°С делают пересев на среду Эндо и желточно-солевой агар. При обнаружении подозрительных колоний производят их микроскопию и далее исследуют по соответствующим схемам.

Для выявления синегнойной палочки специальные посевы можно не производить, так как она дает ползущий рост с характерным запахом земляничного мыла на среде Эндо.