Работа 29. Исследование состава нуклеиновых кислот

Раздел 4 Нуклеотиды

Контрольные вопросы

Качественные реакции на открытие составных частей сложных белков

Наименова-ние сложно- го белка	Химическая структура простетичес-кой группы	Употребляе-мые реактивы	Продукты реакции	Чем обусловлена реакция?

1. Что такое гидролиз белка,и какие виды гидролиза вы знаете?

2. В чем заключается отличие сложных белков от простых?

3. Напишите классификацию сложных белков. К какой группе сложных белков относится гемоглобин, и из каких компонентов он состоит?

4. Что такое гликопротеиды, и какие существуют качественные реакции на их углеводную группу?

5. Что такое фосфопротеиды, и с помощью какой реакции можно открыть их фосфорную кислоту? Как связана фосфорная кислота с белковой частью в фосфопротеидах?

Нуклеиновые кислоты – высокомолекулярные соединения, построенные из большого количества мононуклеотидов, соединенных друг с другом фосфодиэфирной связью. Мононуклеотиды состоят из пуринового или пиримидинового основания, углеводного компонента (рибозы или дезоксирибозы) и фосфорной кислоты. Нуклеиновые кислоты обладают кислотными свойствами вследствие диссоциации имеющихся у них остатков фосфорной кислоты. Различные нуклеиновые кислоты характеризуются входящими в их состав пуриновыми и пиримидиновыми основаниями и пентозами. Дезоксирибонуклеиновая (ДНК) кислота представляет собой полимер, состоящий из мономеров – дезоксирибонуклеозидмонофосфатов. Рибонуклеиновая кислота является полимером, состоящим из рибонуклеозидмонофосфатов.

Для изучения состава нуклеиновых кислот проводят кислотный гидролиз дрожжей в присутствии серной кислоты. При продолжительном гидролизе нуклеиновые кислоты распадаются на мононуклеотиды, которые в свою очередь гидролизуются на пуриновые или пиримидиновые основания, пентозу и фосфорную кислоту.

Исследуемый материал: дрожжи.

Реактивы: 10%-ный раствор H₂SO₄, концентрированный NH₃, 1%-ный раствор AgNO₃, молибденовый реактив, концентрированная H₂SO₄, тимол.

Оборудование: круглодонная колба с воздушным холодильником, воронка с фильтром, мерный цилиндр, пробирки.

ХОД РАБОТЫ.

1. Кислотный гидролиз нуклеиновых кислот

Помещают 1 г пекарских дрожжей в круглодонную колбу на 100 мл, добавляют

20 мл 10%-го раствора серной кислоты и 20 мл дистиллированной воды. Колбу закрывают пробкой с длинной стеклянной трубкой и кипятят под тягой в течение часа на асбестовой сетке при слабом нагревании. Через час после начала кипения нагревание жидкости прекращают, дают ей остыть, переносят в цилиндр, доводят водой до первоначального объема и фильтруют. С фильтратом проделывают качественные реакции на составные части нуклеиновых кислот.

2. Качественные реакции на составные части нуклеиновых кислот

2.1. Серебряная проба на пуриновые основания

Нейтрализуют 10 капель гидролизата 1 каплей концентрированного аммиака и добавляют 5 капель 1%-го раствора азотнокислого серебра. Через 3-5 мин выпадает небольшой бурый осадок серебряных производных пуриновых оснований.

2.2. Качественная реакция Молиша на пентозную группировку

При взаимодействии концентрированной серной кислоты с гексозами или пентозами происходит дегидратация их: из пентоз образуется фурфурол, а из гексоз – оксиметилфурфурол. Они дают с тимолом или a-нафтолом в присутствии концентрированной серной кислоты продукты конденсации красного цвета. К 10 каплям профильтрованного гидролизата добавляют 2-3 капли 1%-го раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно наслаивают 20 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется красное окрашивание вследствие образования продукта конденсации фурфурола с тимолом.

2.3. Молибденовая проба на фосфорную кислоту

К 3-5 каплям гидролизата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят несколько минут. Жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении образуется желтый кристаллический осадок комплексного соединения фосфорно-молибденовокислого аммония.