Работа 27. Фосфопротеиды

Фосфопротеиды представляют собой сложные белки, состоящие из простого белка и небелковой части – фосфорной кислоты. Фосфорная кислота связана с белком через гидроксильную группу оксиаминокислот – серина и треонина. К этой группе белков относятся казеиноген молока, виттелин яичного желтка, ихтулин икры и некоторые другие. Фосфопротеиды служат одним из питательных материалов для развития эмбрионов.

Исследуемый материал: молоко.

Реактивы: СН₃СООН, 1%-ный раствор CuSO₄, 10%-ный раствор NaOH, 10%-ный раствор НNO₃, фенолфталеин, молибденовый реактив.

Оборудование: воронки, фильтры, пробирки, стеклянная палочка, пипетки, спиртовка.

ХОД РАБОТЫ. Выделение казеина из молока описано в работе 5 (работа 24)

1. Гидролиз казеина. В пробирку помещают выделенный из молока казеин и приливают 2 мл 10%-го раствора едкого натра. Кипятят 10-15 мин на асбестовой сетке с обратным холодильником, затем охлаждают пробирку и проводят реакцию на продукты гидролиза.

2. Обнаружение белка. Белок обнаруживают биуретовой реакцией. В пробирку к 3 каплям гидролизата добавляют 1 каплю 1%-го раствора сернокислой меди. Появляется розо-фиолетовое окрашивание.

3. Обнаружение фосфата. Оставшийся гидролизат подкисляют несколькими каплями 10%-го раствора азотной кислоты в присутствии 1-2 капель фенолфталеина до обесцвечивания и отфильтровывают в сухую пробирку. К 5 каплям фильтрата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят несколько минут. Жидкость окрашивается в желтый цвет, а затем при охлаждении выпадает желтый осадок фосфорно-молибденового аммония, указывающий на присутствие фосфата в гидролизате.

H₃PO₄ +12 (NH₄)₂MoO₄ + 21 HNO₃ ® (NH₄)₃(PO₄ × 12MoO₃) + 21 NH₄NO₃ +12 H₂0

Фосфорно-молибденовый

аммоний

Работа 28. Гликопротеиды. Открытие углеводного компонента в яичном белке

Гликопротеиды – сложные белки, в простетические группы которых входят углеводы и их производные. Гликопротеиды содержатся почти во всех тканях и жидкостях организма, носят общее название муцинов и мукоидов и выполняют опорную и защитную функции.

Исследуемый материал: яичный белок.

Реактивы: концентрированная H₂SO₄, 1%-ный раствор тимола, концентрированная CH₃COOH.

Оборудование: пробирки, капельницы.

При взаимодействии концентрированной серной кислоты с гексозами или пентозами происходит дегидратация их: из пентоз образуется фурфурол, а из гексоз – оксиметилфурфурол. Они дают с тимолом или a-нафтолом в присутствии концентрированной серной кислоты продукты конденсации красного цвета. К 10 каплям профильтрованного гидролизата добавляют 2-3 капли 1%-го раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно наслаивают 20 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется красное окрашивание вследствие образования продукта конденсации фурфурола с тимолом.

Оформление. Результаты работ по сложным белкам оформить в таблицу.