2014-01-25
725
Реакция агглютинации (РА) - происходит склеивание корпускулярных АГ-агглютиногенов, под действием АТ - агглютининов, что проявляется образованием мелкозернистого осадка (О-АТ) или грубо хлопьевидного осадка (Н-АТ).
Агглютинат - это комплекс АГ+АТ. РА используют для определения групп крови - реакция Кумбса (антиглобулиновый тест для выявления антирезусных АТ), для определения АТ в сыворотке крови больных при брюшном и паратифе – реакция Видаля, бруцеллёзе – р-ция Хеддельсона и Райта, при сыпном тифе - реакция Вейля-Феликса, при туляремии.
Способы постановки РА.
1. Развёрнутая классическая реакция - объёмный метод в пробирках для определения у больного АТ. К разведениям сыворотки больного добавляют диагностикум, т.е. взвесь убитых микроорганизмов.
2. Ориентировочная реакция - пластинчатый метод, ставят на предметном стекле. К капле диагностической иммунной сыворотки в разведении 1:10, 1:20 добавить чистую культуру возбудителя. Если появляется хлопьевидный осадок, ставят развёрнутую реакцию в 5 пробирках, последняя - контрольная.
Результат «+» с осадком в виде «зонтика» при наличии АТ в крови больного, «-» в контрольной пробирке взвесь гомогенна, учитывается результат невооружённым глазом.
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА)
Реакция ставится: 1) для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий и других высокодисперстных веществ, риккетсий и вирусов, комплексы которых с агглютининами в обычных РА увидеть не удается,
2) для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперсным веществам и мельчайшим микроорганизмам.
Под непрямой, или пассивной, агглютинацией понимают реакцию, в которой антитела взаимодействуют с антигенами, предварительно адсорбированными на инертных частицах (латекс, целлюлоза, полистерол, оксид бария или эритроциты барана, I(0)-группы крови)
В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика).
Постановка. В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных разведений сыворотки. В предпоследнюю лунку вносят - 0,5 мл заведомо положительной сыворотки и в последнюю 0,5 мл физиологического раствора (контроли). Затем во все лунки добавляют по 0,1 мл разведенного эритроцитарного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 2 ч.
Учет. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном - оседают в виде пуговки или колечка.
Реакция преципитации – РП.
Осаждение комплекса АГ+АТ образуется в результате соединения растворимого АГ со специфическим АТ. Осадок - преципитат образуется в виде мутного «кольца». Р-ция широко применяется в судебной медицине.
1. Реакция кольцепреципитации – в пробирке путём наслоения раствора АГ на иммунную сыворотку, при оптимальном соотношении которых на границе этих растворов образуется непрозрачное «кольцо» - преципитат. Широко используется в судебной экспертизе.
2. Реакция термопреципитации - для диагностики сибирской язвы, для иммунной индикации, если в качестве АГ выступают водные экстракты тканей или органов.
3. Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони в агаровом геле для определения токсигенности дифтерийных палочек.
4. Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини для определения содержания в крови иммуноглобулинов разных классов.
5. Иммуноэлектрофорез – сочетает метод электрофореза и реакцию преципитации.
6. Реакция флокулляции – появление хлопьевидной массы или опалесценции при реакции токсин-антитоксин.
