2020-01-14
173
В соответствии с принятой международной номенклатурой и инструкции к БГКП отнесены грамотрицательные не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24-48 ч, в основном являющиеся представителями родов Esherichia Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia (т.е. учитываются как цитратотрицательные, так и цитратположительные варианты БГКП).
Методы исследования на БГКП приведены в ГОСТ Р 52816-2007, при этом следует учитывать следующие методические рекомендации (Рис. 4.).
Рис.4 Схема исследования смывов и содержимого с поверхности яиц на коли-титр
Для посева используют то количество продукта (0,01 и 1 г.), в котором предусматривается отсутствие БГКП (колиформных бактерий) т.е высевают три последовательных десятикратных разведения.. Посев производят в среду Кода с лактозой (с поплавками) с соблюдением соотношения продукта и среды 1:10.
Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. При появлении роста наблюдают на среде Кода изменение цвета питательной среды (с зеленого на желтый) и тогда производят посев на чашки со средой Эндо секторами.
|
|
|
Посев производят петлей из пробирки с измененным цветом среды, так, чтобы получить рост изолированных колоний. Чашки с посевами инкубировуют при температуре 37 °С в течение 18 - 24 ч.
При наличии на среде Эндо колоний типичных для кишечных палочек (колиформных бактерий) их окрашивали по методу Грама и микроскопировали.
Обнаружение типичных для кишечных палочек грамотрицательных не содержащих спор палочек указывало на наличие бактерий группы кишечных палочек в анализируемой массе продукта и несоответствие продукта микробиологическому нормативу.
Определение бактерий рода Salmonella
Исследования яиц и яйцепродуктов на сальмонеллы проводят в соответствии с Методическими указаниями"Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды" (1990 г.), при этом используют смывы с яичной скорлупы и желток яиц, а также яйцепродукты.
Сальмонеллы - обширный род семейства энтеробактерий, включающих более 2200 серотипов, большинство из которых обладает патогенными свойствами. К сальмонеллам относятся аэробные и факультативно-анаэробные грамотрицательные подвижные (за исключением S. gallinarum-pullorum) палочки, хорошо растущие на обычных питательных средах и разнообразных пищевых субстратах.
При взятии смывов с яичной скорлупы один тампон используют для исследования 10 яиц. После взятия смывов тампон помещают в 10 см3 предварительной среды обогащения физиологический раствор с последующим исследованием.
|
|
|
При исследовании желтков в стерильную посуду помещают 5 желтков (одна проба), их гомогенизируют и используют для посева (Рисунок 5,6).
Навеску продукта (25 г или др.) высевают в пептонную буферную воду в соотношении 1:9. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18 - 24 ч.
После этого производят пересев по 1 см3 культуры из пептонной буферной воды в селенитовый бульон в соотношении посевного материала и среды 1:9. Посевы инкубируют 24 - 48 ч при 37 °С.
а б
в
Рис.5. Подготовка пробы из 5 желтков
а- исследуемая проба;,б,в - этапы подготовки пробы желтков к исследованию
Через 24 ч и 48 ч со второй среды обогащения селенитового бульона пересевают на две дифференциальные среды: Эндо и висмут-сульфитный агар.
Посевы просматривают через 18 - 24 ч термостатирования при 37 °С. При отсутствии роста подозрительных колоний инкубирование посевов продолжают еще 24 ч.
Оценка результатов. Сальмонеллы на среде Эндо растут в виде прозрачных бесцветных колоний.
а б
Рис.6 Посев на питательные среды
а- посев на среду Эндо; б- посев на ВСА
На висмут-сульфитном агаре сальмонеллы растут в виде черных колоний с характерным металлическим блеском, при этом наблюдается прокрашивание в черный цвет участка среды под колонией.
Исключение составляют S. paratyphoid, S. choleraesuis, S. abortusovis, S. gallinarum-pullorum и некоторые другие, которые при росте на висмут-сульфитном агаре образуют нежные светло-зеленые или серовато-зеленые колонии.
Определение бактерий рода Proteus в яйцепродуктах(меланже)
Сущность метода заключается в определении морфологии и роста на питательных средах, способности гидролизовать мочевину и образовывать сероводород.[38,39]
Проведение анализа. Для подтверждения наличия протея в Н-форме 0.5 см3 анализируемой взвеси (1см3 приготовленной испытуемой взвеси содержит 0,2г исследуемой пробы) вносят в конденсационную воду свежескошенного мясопептонного агара, разлитого в широкие пробирки, не касаясь поверхности среды (по методу Шукевича). Вертикально поставленные пробирки помещают в термостат с температурой 37 0С, Через 18-24 ч посевы просматривают. Обращают внимание на наличие ползучего вуалеобразного налета с голубым оттенком; на скощенном мясопептонном агаре культура должна поднимается из конденсационной жидкости вверх по поверхности среды.
Для обнаружения нероящихся О-форм проводят посев на поверхность агара Плоскирева.
Определение Staphylococcus aureus в яйцепродуктах(меланже)
Сущность метода заключается в определении морфологии, характера роста на специальных питательных средах.
Проведение анализа. Из разведения анализируемой взвеси продукта проводят посевы на солевой агар, содержащий 10 г/дм3 хлористого натрия и желточно-солевой агар, содержащий 6,5 г/дм3 хлористого натрия.
Посевы помещают в термостат и культивируют в течение 24 ч при температуре 370С.
Взвесь наносят на поверхность агара в количестве 0,2 см3 и равномерно растирают по всей поверхности агаровой среды.
Учет результатов. Через сутки посевы просматривают и производят учет результатов.
Занятие 4
