II. Санитарно-мнокробиологическое исследование воды

Санитарно-микробиологическое исследование воды включает в себя определение как патогенных, так и санитарно-показательных микроорганизмов. Определение патогенных микроорганизмов про­водится по эпидемиологическим показаниям, а при плановых санитарно-микробиологических исследованиях согласно требованиям СанПиН 2.1.4.1074-01 нескольких показателей (табл. 16).

При оценке ОКБ и ОМЧ превышение норматива не допускается в 95 % проб, отбираемых в течение года. Колифаги определяют только в системах водоснабжения из поверхностных источников пе­ред подачей воды в распределительную сеть. Содержание спор сульфитредуцирующих клостридий определяют только при оценке эф­фективности технологии обработки воды. В случае обнаружения ТКБ, ОКБ, колифагов или хотя бы одного из указанных показателей проводят повторное экстренное исследование воды. Определяемые показатели, количество и периодичность исследований зависят от типа источника водоснабжения, численности населения, обеспечи­ваемого водой из данной системы водоснабжения. Эти данные при­ведены в СанПиН 2.1.4.1074-01. В методических указаниях по санитарно-микробиологическому анализу питьевой воды (МУК 4*2.1018-01 МЗ РФ) регламентированы методы санитарно-микробиологического контроля качества питьевой воды.

Общее число микроорганизмов, или ОМЧ - это общее число мезофильных (вырастающих при температуре 37 °С) аэробных и фа­культативно анаэробных микроорганизмов (МАФАнМ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза.

Таблица 16

Санитарно-показательные микроорганизмы в воде централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения

Для определения ОМЧ 1 мл воды вносят в стерильную чашку Петри и заливают теплым (не выше 55 °С) мясо-пептонным агаром, тщательно перемешивают агар с водой и оставляют до застывания, а затем помещают в термостат.

«Общие колиформные бактерии» - это грамотрицательные, оксидазонегативные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа, при температуре 37 °С в течение 24-48 ч.

Термотолерантные колиформные микроорганизмы входят в со­став ОКБ и обладают всеми их признаками, но кроме того способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при темпера­туре 44 °С в течение 24 ч. Таким образом, ТКБ отличаются от ОКБ способностью ферментировать лактозу до кислоты и газа при более высокой температуре.

Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации. Метод основан на фильтровании определенных объемов воды через мембранные фильтры. Мембран­ные фильтры подготавливаются к анализу в соответствии с указани­ями завода-изготовителя.

Определение ОКБ и ТКБ титрационным методом. Метод основан на накоплении бактерий после посева определенных объемов воды в жидкие питательные среды с последующим пересевом их на диф­ференциальную плотную среду с лактозой и идентификацией коло­ний по культуральным и биохимическим тестам. При исследовании питьевой воды кагественным методом засевают 3 объема по 100 мл. При исследовании воды с целью колигественного определения ОКБ и ТКБ при повторном анализе засевают 3 объема по 100 мл, 3 объема по 10 мл, 3 объема по 1 мл.

Для определения термотолерантных колиформных бактерий ко­лонии, выросшие на плотных средах, пересевают на лактозные среды и инкубируют при температуре 44 °С в течение 24 ч. При образовании газа в лактозной среде накопления, росте на среде Эндо лактозоположительных бактерии и выявлении способностей ферментировать лактозу до кислоты и газа в подтверждающих лактозных средах при температуре 44 °С в течение 24 ч дают положительный ответ о нали­чии в этом объеме воды ТКБ. Во всех остальных случаях дают отри­цательный ответ.

При исследовании количественным методом определяют наибо­лее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ по специальной таблице.

Определение спор сулъфитредуцирующих клостридий методом прямого посева. Сульфитредуцирующие клостридий - спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железо-сульфитном агаре при температуре 44 °С в течение 16-18 ч. Метод основан на выращивании посевов в желе­зо-сульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.

Количественному учету подлежат те посевы, где получены изо­лированные черные колонии в толще питательной среды. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор сулъ­фитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.

Определение колифагов. Колифаги - бактериальные вирусы, спо­собные лизировать Е. соli формировать при температуре 37 °С че­рез 18 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питатель­ном агаре. Определение колифагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении колифагов в среде обогащения на культуре Е. соli и последующем выявлении лизиса (просветления) газона Е. соli на питательном агаре. Метод предназначен для прове­дения текущего контроля качества питьевой воды. На всех этапах исследования используют эталонную тест-культуру Е. соli К12 Stm^R. Просмотр результатов осуществляют в проходящем свете. Учи­тывают зоны лизиса в виде отдельного пятна или отдельной бляшки. Проба считается положительной при наличии зоны лизиса хотя бы на одном секторе и при отсутствии таких зон на контрольной чашке.